第四章：DNA的复制.ppt

DnaB激活引发酶 具体步聚： 引物合成 在新引物的模板连接处装载β钳 核心酶转移到新引物处 合成岗崎片段 完成后随从链的核心酶从β钳脱离，开始下一个岗崎片段的合成 冈崎片段的连接 切除引物：当冈崎片段完成后，DNA聚合酶Ⅰ切除RNA引物，留下的缺口DNA聚合酶Ⅰ补齐。 连接：由DNA连接酶作用冈崎片段，形成完整的DNA滞后链。 DNA复制的终止（Termination） 环形DNA复制的终止 终止序列：E.coli 有两个终止区域，分别结合专一性的终止蛋白，每个区域只对一个方向的复制叉起作用。 如果两个复制叉的延伸速度不一致，先期到达终止子的复制叉会停留等待另一复制叉的经过，共同完成全基因组的发展过程。二个复制叉相距约100kb时速度放慢，通过ter来协调两复制叉到达终点的时间。 专一性终止蛋白 E.coli 中由tus gene编码（terminus utilization substance）其产物Tus(36kD)，Tus能识别ter保守顺序，ter-Tus复合物通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用 DNA复制完成后，两个相扣的子链DNA由拓扑异构酶Ⅳ（一种Ⅱ型拓扑异构酶）解链，结果是随着膜的附着点移动而相互分离，分配到两个子细胞中。 DNA拓扑异构酶 DNA Topoisomerase Ⅳ 线形DNA复制的终止 在真核生物多复制子DNA中，两个相邻复制子的相邻复制叉按相反方向延伸，复制叉在终点汇合后，两个复制叉随即发生融合，一条染色体经复制最后形成了两条姐妹染色单体。 线形DNA复制终止的特点 一般来说，链的终止不需要特定的信号，也不需要特殊的蛋白质参与，到达终止位点后，聚合酶离开双链，终止发生。 问题：线形DNA如何完成5’末端的复制？ T7噬菌体线状DNA的串联体假说 两端的DNA序列区有160bp长的序列完全相同 端粒酶能够保证染色体复制的完整 端粒酶：一种特殊的反转录酶。由蛋白质（反转录酶）和RNA两部分组成，以自身的RNA为模板（RNA模板含有一个半拷贝的重复单位）复制出富含G、T序列的单链尾巴，从而维持端粒的长度。 亲代DNA分子为模板 四种脱氧三磷酸核苷(dNTP)为底物 提供3’-OH末端的引物 多种酶及蛋白质：DNA聚合酶、DNA拓扑异构酶、DNA解链酶、单链结合蛋白、引物酶、RNA酶以及DNA连接酶等 DNA复制的体系 小 结 真核生物DNA的复制特点 有多处复制起始点，在全部完成复制之前，各个起始点上DNA的复制不能再开始。 DNA复制只在S期进行，复制子相对较小，为40-100kb。 DNA复制子的ARS（autonomously replicating sequence） 复制的起始需要起始点识别复合物（origin recognition complex，ORC）参与，ORC结合于ARS。 已发现的真核生物DNA聚合酶有15种以上。真核生物中还存在ζ、η、ι和κ等几种DNA聚合酶，它们承担着修复损伤的功能，但这些修复酶的忠实性都很低。 真核生物DNA聚合酶的特性比较 原核生物DNA的复制特点 细菌染色体的复制是作为一个单位从唯一的复制起点开始，双向进行的。 DNA聚合酶：E. coli中主要有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ。 发现大肠杆菌中有一种酶能够催化DNA的合成。 Arthur Kornberg 命名为DNA聚合酶。即现在的DNA聚合酶I。 获1959年诺贝尔生理和医学奖。 DNA聚合酶I不是复制大肠杆菌染色体的主要聚合酶。 DNA Polymerase I 5’→3’核酸外切酶活性也可用来除去冈崎片段5‘端RNA引物， 5’→3’聚合酶活性使冈崎片段间缺口消失， 3’→5’核酸外切酶活性，保证了DNA复制的准确性。保证连接酶将片段连接起来。 DNA聚合酶II的活性很低，若以每分钟酶促核苷酸掺入DNA的转化率计算，只有DNA聚合酶I的5%，所以也不是复制中主要的酶。 DNA Polymerase II 目前认为DNA聚合酶II的生理功能主要是起修复DNA的作用。 DNA helicases separate the two strands of double helix. 单链结合蛋白（single strand binding proteins，SSBP） 与解开的单链DNA结合，使其稳定不会再度螺旋化并且避免核酸内切酶对单链DNA的水解，保证了单链DNA做为模板时的伸展状态，SSBP可以重复利用。 引物酶（primase） 一种特殊的RNA聚合酶，可催化短片段RNA的合成。这种短RNA片段一般十几个至数十个核苷酸不等，它们在DNA复制起始处做为引物。RNA引物的3’-OH末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子第一个磷酸二酯键的位置。 这可能与尽量减少DNA复制起始