毛细管区带电泳分离和检测利多卡因方法的研究论文.docVIP

　　毛细管区带电泳分离和检测利多卡因方法的研究论文 .freelmol/L NaH2PO4-H3PO4（pH=5.0）缓冲液。先采用压力（20psi）进水5s，随后电动进样（8kV.freel，运行电压30kV，温度20℃，运行时间5min。结果 在0.1～12.5μg/ml范围内呈良好的线性关系和重现性（R2=0.9998，n=5），回收率96.80%～105.8%，日内及日间精密度(RSD)均小于6%。方法的检测限10ng/ml。结论 本方法简便、快速、灵敏，为利多卡因的定量测定提供了新的、更为理想的方法学手段。 【关键词】 毛细管区带电泳；分离；利多卡因 【Abstract】 Objective To establish capillary zone electrophoresis method for the determination and separation of lidocaine.Methods Determination and separation of lidocaine by capillary zone electrophoresis (CZE) and electrophoresis conditions mol/L NaH2PO4-H3PO4 solution (pH=5.0)，the perature at 20℃，UV detection at 200nm，sampling injected 5 seconds ethod had a good linearity and precision l(R2=0.9998). The range of recovery it l.ConclusionThis assay ple，rapid and sensitive. It is a neeans for the determination of lidocaine. 【Key g，其血药浓度达2～4μg/ml。当血药浓度超过5μg/ml时出现中毒症状，超过7μg/ml时出现惊厥［1］，因此其血药浓度监测具有重要的临床意义。以往多采用酶免疫分析法［2］、气相和高效液相色谱法［3］。但成本高，操作繁琐，干扰多，色谱柱易受污染等。而毛细管电泳（Capillary electrophoresis， CE）是20世纪90年代以来迅速发展起来的一种新型的分离检测手段，具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、运行成本低、预处理简单以及应用范围广等技术优势，已在生物医药领域获得了许多成功的应用［4］。本研究结合利多卡因的结构特点，选用毛细管区带电泳（CZE）分离模式，优化缓冲体系、pH值、检测波长、分离电压和温度等条件，建立了适合利多卡因定量测定的CZE方法。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 毛细管电泳仪：美国Beckman公司P/ACE5000型配有紫外吸收（UV）、二极管阵列（PDA）和Beckman工作站；毛细管为涂层石英毛细管，57cm×75μm（河北永年光纤厂），有效长度50cm；PHS-3B精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）；SB2200T超声波洗涤装置（必能超声上海有限公司）。 利多卡因（针剂，0.1g/5ml，山东兖州益健制药有限公司批号：0407182）；利多卡因标准品（宁夏医学院附属医院制剂中心 批号：030408）。NaH2PO4、H3PO4 、HCI和NaOH等试剂均为国产分析纯，水为自制双蒸去离子水。 1.2 样品溶液和缓冲液的制备 1.2.1 标准品及样品溶液的配制 准确称取利多卡因标准品10mg，用双蒸去离子水溶解至100ml。分别配制浓度为12.5、6.25、2.5、0.5和0.1μg/ml标准溶液，用双蒸去离子配制不同浓度的利多卡因样品。用0.45μm微孔过滤器过滤，超声波脱气5min后备用。 1.2.2 运行缓冲液的配制 精密称取NaH2PO4适量，加水制成15～40mmol/L NaH2PO4。用H3PO4和NaOH将其pH值分别调为4.4、4.6、4.8、5.0和5.2低温贮备。 1.3 实验条件的选择 开机后，以1mol/L HCI、0.1mol/L NaOH溶液、水及NaH2PO4-H3PO4缓冲液冲洗毛细管各3min，两次进样之间以0.1mol/L NaOH溶液、水及缓冲液冲洗毛细管3min后进样：先采用压力（20psi）进水5s，随后电动进样（8kV，5s），运行时间5min。以迁移时间、峰高、峰面积的重现性和峰形的对称性作为分离效果的判断依据，综合上述参数优化实验条件。 1.3.1 缓冲体系 根据利多卡因的理化性质及缓冲液的选择原则，选择NaH2PO4-H3PO4为实验的缓冲体系。再以1.2