王镜岩-生物化学-第7章蛋白质的分离纯化和表征.pptVIP

Protein; 蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性 碱/酸越大——pI 越大; 蛋白质的分子量 一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿＝1×C12绝对质量/12 ≈1.66×10-27千克 ;（一）根据化学组成测定最小分子量;（二）SDS－PAGE测定相对分子质量;;;;;;（三）凝胶过滤法测定相对分子质量;蛋白质混合样;三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀;蛋白质胶体溶液的稳定因素： 1.同种蛋白带同种电荷，相互排斥 2.水膜弹性 蛋白质溶液具有丁达尔效应、布朗运动以及不能通过半透膜等性质;（二）蛋白质的沉淀 Pr从胶体溶液中析出 Ⅰ可逆沉淀： 温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷 Pr结构和性质没有变化 适当条件下可重新溶解 ——非变性沉淀 pI沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等 ; 不可逆沉淀 强烈沉淀条件 破坏Pr胶体溶液稳定性 也破坏Pr结构和性质 ???淀不能再重新溶解 ——变性沉淀 如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐 和生物碱沉淀等;1.盐析法 加入中性盐脱去蛋白质的水化层，盐析一般不引起变性;等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 原因？;盐析;2.有机溶剂沉淀 脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用 3.等电点沉淀