氨基酸对胰岛素纤维形成及细胞毒性的影响论文.docVIP

　　氨基酸对胰岛素纤维形成及细胞毒性的影响论文 王一敏，张献清，贺静，曾成鸣 【摘要】 目的: 研究氨基酸对牛胰岛素淀粉样纤维的生成、形态和细胞毒性的影响. 方法: 采用硫黄素（ThT）荧光检测牛胰岛素形成淀粉样纤维的动力学曲线，透射电镜观察纤维形态；以淀粉样纤维诱导人红细胞的聚集和溶血为指标评估纤维对细胞膜的损害作用. 结果: 牛胰岛素在pH 1.6，57℃的条件下，可在1.5 h开始形成淀粉样纤维，5种氨基酸即组氨酸（His）、脯氨酸（Pro）、苏氨酸（Thr）、谷氨酰胺（Gln）和精氨酸（Arg）具有延迟胰岛素纤维化的作用.freelaAldrich公司）；其他均为国产分析纯试剂. H600型透射电镜（日本日立公司），Varian Cary Eclipse型荧光光度计（美国Varian公司），3k30型冷冻离心机（Sigma公司）；1240型紫外可见分光光度计 (日本岛津公司). 1.2方法 1.2.1胰岛素淀粉样纤维在含有100 mmol/L NaCl的盐酸（pH1.6）中配制1 g/L牛胰岛素水溶液，加入50 mmol/L氨基酸，于57℃水浴中孵育，按一定的时间间隔取样，加入到20 mmol/L TrisHCl（pH 8.0）中，加10 μmol/L ThT，混匀后检测ThT荧光强度，激发波长440 nm，发射波长482 nm. 制作纤维生长曲线. 并同时