细胞工程(第二章).ppt

* * 第二章 细胞工程研究常用设备和技术 实验室常用仪器设备 基本技术 培养基及其配制 主要内容 第一节 实验室常用仪器设备 一、水纯化装置 用于细胞工程的培养基和其他溶液一般都要用重蒸水或三次蒸馏水来配置。 实验室常用的纯水装置：不锈钢蒸馏水器、石英自动纯水蒸馏器、超纯水装置。 主要由多个过滤部件组成。水先经过预过滤层除去粗杂质，然后经过有机层、去离子层、去热原层，再经过0.22微米滤膜过滤除菌，得到超纯水。 二、超声波清洗器 超声波清洗功能主要是利用超声波在液体中的“空化”作用，使黏附在物体表面的各类污物剥落，同时超声波在液体中又能加速溶解作用和乳化作用，再加上合适的清洗剂配合，就可以达到清洗目的。 超声波清洗效果好、速度快，尤其对于采用一般常规清洗方法难于达到清洁度要求，以及手工清洗解决不了的缝隙、小孔、内腔等。 三、蒸汽压力消毒器 实验室中最常用的灭菌设备就是高压蒸汽灭菌器。常见的有立式、卧式和手提式几种。 基本操作步骤： 向锅内注水到规定刻度，注意保持导气管通畅； 将待灭菌物放入锅内，盖紧锅盖； 通电加热，排放冷气； 加热至压力额定值，开始计时； 计时结束，切断电源，自然降压至接近零； 灭菌器盖微开5 min，取出灭菌物； 四、电热干燥箱 用于器械和玻璃器皿的干热灭菌或烘干。 使用方法如下： 将待灭菌物放入箱内，注意不要放得太挤，以利空气流通； 关箱门，接通电源，打开开关，旋动恒温调节器至指定温度。若需鼓风，则应与升温同时开始，不能先升温后鼓风，以免导致起火或玻璃器皿破裂； 温度上升至指定温度后，维持所需的时间； 灭菌或烘干完毕后切断电源，待温度降至70℃以下时，可开箱取物； 五、过滤除菌装置 玻璃漏斗式滤器 滤板是由玻璃粉热压而成，具有微孔，清洗麻烦，很少使用。 蔡氏滤器 使用混合纤维素酯微孔滤膜，孔径有0.22微米、0.45微米等不同规格。蔡氏滤器可分为抽滤式（负压）和加压式（正压）两种。 针头式滤器 针头式加压塑料小滤器的上下部件为螺旋式连接，中间夹一层微孔滤膜（常用孔径为0.22微米），滤器上部的进液口可直接接在注射器上，液体经注射器加压进入滤器，经过膜过滤除菌后，由滤器下部的出液口流出。 六、超净工作台 超净工作台是以空气过滤去除杂菌孢子和灰尘颗粒来达到空气净化目的的装置，主要由鼓风机、滤板、操作台和照明灯组成。 单人和双人，垂直和平流； 75%酒精擦拭超净台，放入器械，开紫外灯30min，关闭紫外灯，点燃酒精灯在下火焰方进行操作。 生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。 七、生物安全柜 根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为一级、二级和三级三种类型。 一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。 二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。二级生物安全柜依照入口气流风速、排气方式和循环方式可分为4 个级别：A1 型，A2 型，B1 型和B2 型。所有的二级生物安全柜都可提供工作人员、环境和产品的保护。 三级生物安全柜是为生物安全防护等级为4级实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golve box)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验，如进行SARS、埃博拉病毒实验等。 八、培养箱 细胞在离体培养时，都需要一定的温度，尤其是哺乳动物细胞的要求较高，在多数情况下温度变化不能超过±0.5℃。 动物细胞培养 恒温培养箱包括能控制和调节温度的一般培养箱和增加了湿度和CO2调节的二氧化碳培养箱。 植物细胞培养 增加了照明条件的光照培养箱、人工气候箱。 九、显微镜 体视显微镜（解剖镜）：用于观察和剥离较小器官和组织，也可用来观察愈伤组织的生长和发育。 透射显微镜：物镜在载物台上方，用于观察切片、压片、涂片等。 倒置显微镜：物镜在载物台下方，可以从培养皿、培养瓶或摇瓶的下方观察培养物，用来实时观察活细胞的生长情况。 * * *