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第4章 胚胎培养 第4章 胚胎培养 1904年的Haning最早成功地培养了萝卜和辣椒的胚，并萌发形成小苗 30年代成功地把兰科植物的胚培养成小植株。 40年代在苹果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、马铃薯、甘蓝与大白菜的种间杂种的胚胎培养、胚乳培养及子房与胚珠培养均取得了不同程度的进展。 本章教学目的与要求 (1)掌握胚培养和胚乳培养的操作步骤； (2)了解胚珠培养和子房培养的操作步骤。 ①克服远缘杂种的不育性， ②使胚胎发育不完全的植株获得后代，(兰天麻) ③缩短育种年限，提高育种效率。 种子的结构 第一节、胚培养 胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 1、幼胚培养 幼胚是指子叶期以前的幼小胚 远缘杂交育种 现在可使心形期胚或更早期的长度仅0.1～0.2mm的胚生长发育成植株 由于胚越小就越难培养。所以，尽可能采用较大的胚进行胚养 现在幼胚培养成功的有大麦、荠莱、甘蔗、甜菜、胡萝卜等。 2、成熟胚培养 成熟胚一般指子叶期后至发育完全的胚,培养较易成功 将成熟或未成熟种子用70％酒精进行几秒钟的表面消毒，再用无菌水冲洗3-4次，然后在无菌条件下进行解剖，取出胚并接种在适当的培养基上培养。 二、培养过程： 1、幼胚培养过程： 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 幼胚的发育方式： 1）胚性发育； 2）早熟发育； 3）产生愈伤组织 2、成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例 1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼苗。 三、培养基与培养条件 1、培养基 常用的培养基有Tukey，MS，B5，Nitsch培养基，其中前者适于成熟胚培养，其他适于未成熟胚和幼胚培养 2、培养条件： 1）糖类：幼胚需求较多 2）附加成分：椰乳 3）光照：光照可以促进某些植物胚的转绿，利于胚芽生长，而黑暗则利于胚根生长。因此以光暗交替培养较为有利。 4）培养方式： 幼胚培养适于液体培养， 成熟胚适于固体培养 四、胚培养的应用 1)在远缘杂交育种中:克服杂种胚不能正常发育 2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率 3)缩短育种周期 4)测定休眠种子的萌发率 5)理论研究中的应用 第二节、胚乳培养 胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳 培养:White或MS诱导培养基---25-27℃--暗或弱光 发育:诱导形成愈伤组织----再分化形成胚状体或不定芽---生根培养----植株。 胚乳植株染色体数目的检查 取根尖、幼叶或愈伤组织 0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在25℃浸泡4-8hr 流水冲洗5-10min 卡诺氏液或FAA液固定 1mol/L盐酸，60 ℃水浴8-10min 染色、压片、镜检、计数 二、培养基与培养条件 三、胚乳再生植株的染色体倍数 稳定型：三倍体 畸变型：除少数是三倍体，多数是由多种倍性细胞组成的嵌合体 四、胚乳培养的应用 1、胚乳培养可得到三倍体植株，产生无籽果实。或加倍形成六倍体植株进行育种。 2、胚乳培养可得到倍性不同的愈伤组织，可分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 第三节 胚珠和子房培养 一、胚珠培养 定义：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 胚珠培养类型： （二）、培养基：White,Nitsch,MS 二、子房培养 定义：子房培养是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 （一）子房培养的培养过程 1、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房或幼花，消毒 2、子房培养：固体或液体培养均可 性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株； 体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤组织----二倍体植株； 三、胚珠和子房培养的应用 （二）子房培养的应用 1、授粉子房培养目的：挽救杂种胚 2、未授粉子房培养目的：获得单倍体植株。 本章小结： (1)胚胎培养包括：幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养和胚乳培养等。 (2)胚胎培养的意义。 (3)离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养。 (4)未成熟胚培养，三种不同的生长方式，胚性发育；早熟萌发；形成愈伤组织。 (5)胚培养的作用。 (6)检查胚珠植株的染色体数目的方法。 (7)分析胚珠培养和子房培养的发育途径。 * * 大 家 好 ！ 植物组织培