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南华大学心血管病研究所，动脉硬化学湖南省重点实验室 一、研 究 背 景 二、ApoA-I/ABCA1途径抗炎的可能机制 三、研 究 方 法 四、研 究 结 果 图1. ApoA-I下调LPS诱导的TNF-α蛋白水平 图2. 核连缀实验显示apoA-I对TNFα转录无明显影响 图3. ApoA-I显著下调LPS诱导的TNF-α mRNA水平 图4. ApoA-I促进TNFα mRNA的降解 五、讨 论 六、结 论 * 报告人: 尹凯（博士研究生） 导 师：唐朝克（教授） TOLL样受体适配蛋白MyD88 偶联 胆固醇逆向转运与炎症 KA Smoak, et al. Cell Metabolism, Jun 2010; 11(6): 493-502. （IF：17.35） 1、高密度脂蛋白（HDL）与心血管疾病的风险呈负相关，促进胆固醇逆向转运（RCT）是其抗动脉粥样硬化（As）的关键机制。 3、最新的研究显示apoA-I/ABCA1 途径具有抗炎作用，将为As的防治提供新的思路。 2、ApoA-I/ABCA1 途径介导细胞内胆固醇流出，是RCT的关键环节，也是目前研究最多的领域。 Kai yin,Duan-fang Liao,Chao-ke tang. ABCA1 : A Possible Link Between Inflammation And Reverse Cholesterol Transport. Mol Med, Sep 2010; 16(9-10): 438-49. ( IF:5.02 ) ? 1、以脂多糖（LPS）处理的THP-1巨噬细胞作为炎症细胞模 型，观察apoA-I对TNFα表达的影响。 2、采用核连缀试验观察apoA-I对TNFα 转录的影响。 3、利用放线菌素D终止转录，观察apoA-I 对TNFα mRNA降解 的影响 。 4、利用SiRNA干扰等技术探讨apoA-I 促进TNFα mRNA降解 的分子机制 。 第一部分: ApoA-I通过转录后途径调节TNFα表达 图1. Western-blot检测TNF-α的蛋白质表达 图2：核连缀转录分析检测apoA-I对TNF-α转录的影响 图3. 荧光定量PCR检测TNF-α的mRNA表达水平 图4. 放线菌素D（act D）终止转录，检测不同时间点TNFα的mRNA水平。 图5. 含TNF-α 3`UTR的CAT报告基因的构建 pCAT-control pCAT-TNF-3`UTR pCAT-TNF-3`UTR-ARE pCAT-TNF-3`UTR-AREmut 图5. 构建含TNF-α 3`UTR不同序列的 氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因载体，转染THP-1巨噬细胞。 图6. ApoA-I通过TNFα 3`UTR ARE促进mRNA降解 第二部分: ApoA-I通过TTP促进TNFαmRNA降解 四、研 究 结 果 图1. ApoA-I上调Tristetraprolin(TTP)的表达 图1. Western-blot检测TTP的蛋白质表达 图2. TTP siRNA抑制apoA-I对TNFα的下调作用 图2A. Western-blot检测TTP SiRNA效果 图2B. TTP SiRNA抑制apoA1对TNFα的下调作用 A B 图3. TTP siRNA抑制apoA-I对TNFαmRNA的降解 图3. PCR检测TTP SiRNA对apoA1促进TNF-αmRNA降解的影响 第三部分: ApoA-I通过激活STAT3促进TTP的表达 四、研 究 结 果 图1. ApoA-I激活THP-1细胞STAT3 图1A. Western-blot检测apoA1对p-STAT3表达的影响 图1B. Western-blot检测apoA1对核内STAT3表达的影响 A B 图2. 阻断STAT3抑制apoA-I对TTP的上调作用 图2A. Western-blot检测AG490对核内STAT3表达的抑制作用 图2B. Western-blot检测AG490对apoA1促进TTP表达的影响 A B 第四部分: ApoA-I通过ABCA1激活STAT3/TTP途径 四、研 究 结 果 图1. ABCA1介导apoA-I对STAT3的激活作用 A B B 图1A. Western-blot检测普罗布考对ABCA1表达的影响 图1B. Western-blot检测普罗布考对apoA1作用下STAT3磷酸化的影响 图2. 阻断ABCA1抑制apoA-I对TTP的上调作用 图2. Western-blot检测普罗布考对apoA1作用下TTP表达的影响 图3. 阻断ABCA1抑制apoA