专题1基因工程知识点汇总课件.doc

专题1 基因工程知识点汇总 1．1 DNA重组技术的基本工具 一、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 和 ，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 水平上进行设计和施工的，因此又叫做 。 二、限制性核酸内切酶 1、切割DNA的工具是 ，又称 。 2、这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。 3、由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。 4、DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段，末端通常有两种形式，即 和 。 三、DNA连接酶——“分子缝合针” 根据DNA连接酶的来源不同，可以将它分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为DNA连接酶。DNA连接酶只能将 连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。另一类是从 分离出来的，称为T4DNA连接酶。T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的 ，又可以“缝合”双链DNA片段的 ，但连接 之间的效率比较低。 四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1、基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。 2、现在通常使用的载体是 ，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。 3、质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以 复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。 4、其他载体还有 和 等。 5、作为载体必须具备以下条件： ①能够在宿主细胞中 ；②具有多个 ，供外源基因连接；③具有某些 ，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 1．2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取：1、目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取目的基因 ① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 ② 种类 基因组文库：含有一种生物的 基因 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③ 目的基因的获取：根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 （2）利用PCR技术扩增目的基因。 ① PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ②原理： ③前提：有一段已知目的基因的 序列。以便根据这一序列合成 。 ④过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ______的作用下进行延伸成DNA。方式：指数扩增=2n（n为扩增循环的次数） （3）人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。 二、基因表达载体的构建 1、表达载体的组成：目的基因+ + + 标记基因等。 2、启动子：位于基因的 ，它是 结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3、终止子：位于基因的 ，终止 。 4、表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；使目的基因 ____ 和发挥作用。 5、标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 6、不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 的过程。 （二）方法 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 ① 农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ② 转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 （2）基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （3）花粉管通道法： 2．将目的基因导入动物细胞（1）方法： 技术。 （2）操作程序：目的基因表达