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Beijing Solarbio Science Technology Co., Ltd
Tel: 010
Solarbio Fax: 01082
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大鼠外周血单个核细胞分离液试剂盒
规格:3×200mL/kit
保存:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期2年。无菌开封后,保存于室温。
组成:
各种动物外周血单个核细胞分离液 200mL
全血及组织稀释液 200mL
细胞洗涤液 200mL
产品简介:
本产品是一种用于分离动物外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据
血细胞的密度差异,通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将单个核细胞从外周血中分离出来。
适用于从动物抗凝血液中分离单个核细胞,无菌条件下分离的单个核细胞可用于培养。
本品仅供科研使用。
操作步骤:
1. 取新鲜抗凝全血 (EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液
或者PBS稀释全血。
2. 在离心管中加入适量分离液 (当稀释后血液体积小于3mL时,加入3mL分离液;大于等于3mL,加入等体积
分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将稀释后的血液平铺到分离
液液面上方,注意保持两液面界面清晰。 (可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液
上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层
界面。如果样品较多加样时间较长,在离心之
前出现红细胞成团下沉属正常现象。)
3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血
液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越
长,最佳的分离条件需摸索,离心转速最大不
超过1200g)。 水平离心 血浆层
4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血 单个核细胞层
浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液 分离液层
之间的白膜层即为单个核细胞层,离心管底部 红细胞层
是红细胞与粒细胞。
分离前 分离后
5. 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管
中, 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。
6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
1 2
第 页 共 页
7. 重复步骤6
8. 弃上清,细胞重悬备用。
注意事项:
A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。
B. 分离液使用时应始终保持室温 (18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条
件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 血液样本最好为新鲜抗凝血 (采血2h以内),为保持单个核细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。
D. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞
得率及纯度。
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