实验一喜树碱含量的紫外可见分光光度分析.ppt

实验一：喜树碱含量的紫外分光光度分析 一、实验目的 掌握喜树碱的提取方法和紫外可见分光光度计的使用 二 、实验原理 紫外分光光度分析是基于被测物质的分子 对紫外光 具有选择吸收的特性而建立的分析方法。 不同物质的紫外吸收特性不同，因而物质紫外光谱是鉴定物质结构的重要信息之一。 在特定波长下（通常选择物质的吸收峰值波长），在一定浓度范围，物质的含量与吸光度成正比 二 、实验原理 选择5个以上的浓度，分别测定吸光度，可进行线性回归。未知浓度的样品可根据标准曲线计算浓度。Y=aX+b 二 、实验原理 喜树碱(camptothecin)，我国特有树种喜树中含有的生物碱，可溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂。 二 、实验原理 喜树碱在254nm处有特征吸收。 仪器：紫外可见分光光度计、超声波清洗机、天平、25mL容量瓶、10mL容量瓶、量筒、移液枪等 试剂：60%乙醇溶液 标准品：喜树碱标准溶液(40μg/mL) 喜树果实 2008年3月购自四川省金堂县，60℃下烘干48小时，粉碎备用 精密称取1 mg喜树碱标准品，置于25 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液超声助溶，定容至刻度，备用。 分别吸取喜树碱标准溶液1、2、3、4、5 mL置于10mL容量瓶中，用60%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀; 分别将标准溶液倒入到小药瓶中,并标记; 每个浓度取1mL于1.5mL离心管中,标记清楚,冻存,用于高效液相色谱分析; 在254nm，分别以60%乙醇为空白测定吸光度，并作出吸光度-浓度曲线。 准确称取1 g喜树果粉放入25 mL容量瓶中;（每2人称一份样品，每组3-4个重复）； 加入60％乙醇溶液约20 mL; 混匀后超声提取30分钟; 取出静置，至室温时定容至25mL，摇匀; 将样品倒入到小锥形瓶中,并标记清楚; 室温下取1 mL 12000rpm 离心15分钟; 取500μL上清于干净的离心管，标记清楚后冻存，用于高效液相色谱分析； 另取100uL上清液加入到已加入3.9mL60%乙醇的小药瓶中，混匀）。 在254nm下，以60%乙醇为空白测定吸光度并根据标准曲线计算样品中喜树碱含量。 喜树果实中喜树碱含量： CPT（μg/g）= C为对应工作曲线的样品喜树碱浓度 V为提取液体积（25mL） M为样品质量(g) 比较紫外分光光度法和高效液相色谱法测定喜树果实中喜树碱含量的差异，并分析产生差异的原因。 * * C1 C2 A1 A2 = 三、实验仪器与试剂 四、实验材料 五、标准曲线的绘制 六、实验步骤 七、喜树碱含量的计算 C×V×40 M 八、思考题