生物工艺制品学复习题及答案.doc

1、微生物发酵培养有哪些方式？ 答：有固体发酵，半固体发酵，液体发酵三种用人工诱变的方法，有意识地改变微生物的代谢途径，最大限度地积累产物，这种发酵形象地称为代谢控制发酵，最早在氨基酸发酵中得到成功应用。它是利用遗传学或其它生物化学的方法，人为地在脱氧核糖核酸（DNA）的分子水平上，改变和控制微生物的代谢，使有用的代谢产物大量生成、积累的发酵技术。 IMP发酵应具备的条件： 答：（1）选择肌苷酸酶弱或丧失的出发菌株（不分解肌苷酸） （2）切断IMP向下的两条支路，使IMP大量生成和积累； （3）选育结构类似物双重抗性突变株； （4）限量添加Mn2+，解除细胞膜渗透型障碍。 19、离子交换树脂法提取肌苷酸的工艺流程及说明？ 答：过滤、酸化：发酵液加活性白土（15g/L)，压滤除菌体，清液加1.5倍体积的0.1mol/LHCl。 阳离子交换：732#（H＋）型树脂，上柱液体积为湿树脂体积的6倍。流出液用NaOH溶液调pH8.5-9.5。 阴离子交换：上柱液体积为湿树脂体积的6倍，90％肌苷酸被吸附。 洗脱：先用水冲洗柱子，再用0.05mol/LHCl洗涤至流出液pH为3.5；然后用含0.05mol/LHCl和0.05mol/LNaCl混合液进行洗脱。收集肌苷酸流出液。 减压浓缩：洗脱液用40％NaOH调pH至7.5，减压浓缩15－20倍体积。 结晶：浓缩液加入2倍体积95％乙醇，低温育晶，析出肌苷酸粗品。 重结晶：肌苷酸粗品加水溶解，加乙醇低温结晶，过滤，晶体用30％乙醇洗涤2－3次 肌苷酸精品：湿肌苷酸晶体烘干，制得肌苷酸精品。 20、GMP发酵应具备的条件： 答：枯草芽孢杆菌具有GMP的环形支路：菌株因丧失SAMP合成酶（Ade－）活性，切断从IMP到AMP的通路，使生成的IMP全部转向合成GMP，同时丧失GMP还原酶活性，使生成的GMP不致还原为IMP。 为了积累鸟苷，核苷酶或核苷磷酸化酶等鸟苷分解酶的活性必须微弱； 鸟苷酸（GMP）是嘌呤核苷酸全合成的终产物，为了积累鸟苷，必须解除GMP对PRPP转胺酰酶，IMP脱氢酶及GMP合成酶等的反馈抑制与阻遏。（封闭基因或选择渗漏） 为了抑制肌苷产生，高效率积累鸟苷，由IMP脱氢酶及GMP合成酶所催化的反应应该比核苷酸酶（IMP---IR)所催化的反应优先进行。 21、种子扩大培养? 答：温度控制：pH控制： 接种量和接种方式：溶解氧的控制调节搅拌速率，调节通气速率，，控制菌体浓度，控制基质浓度刺激细胞生长和增殖的细胞外多肽信号分子A、预处理 ：目的在于浓缩目的产物，去除大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，利于后续的分离纯化过程。 措施：加少量絮凝剂沉淀蛋白和微粒（防止乳化）