生物碱类成分的薄层色谱分析.ppt

生物碱类成分的薄层色谱分析 生物碱（alkaloid）是一类含氮的碱性天然有机物，大多具有复杂的环状结构，氮原子多在环内，具光学活性，有显著的生理作用，是中药中重要的有效成分。 分布广泛，以双子叶植物最多，其次是单子叶植物、裸子植物。 种类多，按结构可分为12类。大具有重要生理活性的大多集中于异喹啉、吲哚、莨菪烷类衍生物。 常用含生物碱的中药 生物碱的理化性质： 1. 物理性质 2. 旋光性 3. 酸碱性 4. 溶解度 5. 沉淀反应 一．影响薄层色谱分析的主要因素 （一）样品的预处理及供试液的制备 样品供试液的精制方法： 1．单一溶剂萃取法 2．分段萃取法 3．液液萃取法 4．固液萃取法 （二）薄层色谱的上样技术 不良的上样是最主要的误差来源之一 1．原点位置对样品容积的负荷量是极为有限的 2．上样环行色谱效应 3．供试液的溶剂在原点的残留 4．上样装置对薄层表面的机械损伤对色谱质量的影响 （三）吸附剂的活性与相对湿度 对薄层色谱的影响 1．吸附剂的活性：是由表面能和表面积决定的。 (1) 硅胶 – 硅醇基 – 与化合物形成氢键 (2) 薄层板活化目的：水合硅醇基 – 游离硅醇基 (3) 在不同的相对湿度下，可达到不同程度的吸附平衡 (4) 薄层色谱的重现性差，薄层板在不同的相对湿度下操作是主要原因之一 2．相对湿度的控制方法：展开缸中放入适当浓度的硫酸 （四）溶剂蒸气在薄层色谱中的作用： 饱和问题 （五）关于薄层色谱的优化及溶剂系统 的选择 1．依靠薄层色谱分离混合物物质需要解决的主要问题有两个： （1）相邻物质对的分离 （2）在一个宽极性范围内的多组分混合物的分离 2．展开剂的选择和优化 主要考虑两个方面： （1）溶剂的极性：要求使欲分离的主要物质能在Rf值0.3 – 0.7之间 （2）溶剂的选择性：要求达到最佳分离度 （六）温度对薄层色谱的影响 （七）影响薄层色谱的其它因素 二．生物碱样品液制备 （一）与天然药物化学提取、分离、定性的不同点 （二）生物碱提取 1．提取溶剂 （1）非极性溶剂 （2）极性溶剂 （3）混合溶剂 2．提取方法： 冷浸、渗漉、超声波、索氏提取、热回流提取 （三）生物碱样品的精制 1．萃取法 2．色谱法 3．离子对法 三．生物碱薄层色谱的定性分析 1．展开剂 2．吸附剂 3．显色剂 4. 对照品定性分析 （化学对照品、对照药材、阴性对照） 5．以Rf值为基准定性分析 （边缘效应及其它影响因素） 6．薄层扫描定性分析 （薄层指纹图谱） 四．生物碱薄层色谱的定量分析 1．薄层色谱 - 分光光度法 （1）斑点定位：不加显色剂显色；使用显色剂（可挥去；有显色反应） （2）洗脱：溶剂的选择 （3）测定：薄层取样量一般为几微克-几十微克，常用测定方法为UV或可见分光度法。 注意事项：空白对照；回收率的检测 2．薄层扫描法 （1）吸附剂和薄层板的选择 （2）点样方法 （3）色谱条件的选择：展开剂、显色剂 （4）相关方法学考察 （5）误差的来源 * * 黄连的TLC 黄柏的TLC 山豆根 TLC 苦参TLC-1 苦参TLC-1 苦参 TLC-2 川贝母TLC 伊贝母TLC 淅贝母TLC 天仙子TLC 华山参TLC 洋金花TLC 马钱子TLC 青风藤TLC 罂粟壳TLC 延胡索TLC