细菌染色和涂片观察的方法.ppt

3）、革兰氏染色法的临床意义 ①、鉴别细菌：该染色法可将细菌分为GP菌与GN菌两大类，这样可以初步识别细菌、缩小范围，便于进一步鉴定。 ②、了解细菌与致病性的关系：大多数GP菌的致病物质主要为外毒素；而大多数GN菌的致病物质主要为内毒素。通过革兰氏染色，可了解细菌的致病物质，从而做出相应的治疗对策。 ③、选择抗菌药物：GP菌和GN菌在细胞壁等结构上有很大差别，因而对抗菌药物的敏感性不同。如大多数GP菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等敏感；而大多数GN菌对这几种抗生素不敏感，但对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感，故临床上可根据病原菌的革兰氏染色性，选择有效的药物进行治疗。 2、 抗酸染色法 有些细菌如结核杆菌、麻风杆菌等分枝杆菌，用一般染色法不易着色，必须使用强染色剂（如石炭酸复红）并采用加热和延长染色时间的方法才能使其着色。且一旦染上颜色后又不易被酸性酒精脱色。这种能够抵抗酸性酒精脱色的细菌，称为抗酸杆菌。应用这种原理进行染色的方法叫抗酸染色法。抗酸染色法常用的有萋—纳二氏染色法和潘本汉氏染色法。 ①染色的步骤： 直接涂片法 夹层杯液基集菌法： 固定——→初染——→脱色——→复 染 石炭酸复红加热 3%盐酸酒精 吕氏美兰 染色过程中的细菌颜色变化： 抗酸杆菌 非抗酸杆菌 镜检与报告： 用光学显微镜镜检(目镜10×，油镜100×)染色痰片。在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色。所见结果按下列标准报告： 1)抗酸杆菌阴性：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌。 2)抗酸杆菌(1+)： 1～9条抗酸杆菌／100视野。 3)抗酸杆菌(2+)： l一9条抗酸杆菌／10视野。 4)抗酸杆菌(3+)： 1～9条抗酸杆菌／每个视野。 5)抗酸杆菌(4+)： ≥10条抗酸杆菌／每个视野。 ③???? 抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。 （三）、特殊结构染色法 细菌的某些基本结构如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特殊结构如荚膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易着色，须用一些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法主要有荚膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等。这些染色法不仅能使特殊结构着色，还可使特殊结构染成与菌体不同的颜色，有利于观察和区别。 在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较高、染色过程要求非常严格，而普通染色法虽不能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特殊结构染色法 （四）、负染色法 所谓负染色法是指使背景着色而细菌本身不着色的一种染色方法。常用的有墨汁染色法。也可用酸性染料如刚果红或水溶性苯胺黑等进行染色。因酸性染料带负电荷，而细菌本身在近乎中性的环境中也带负电荷，同种电荷相排斥，故染色时菌体不着色，而只能使背景着色。实践中常用墨汁负染色法配合单染色法（如美兰染色法）检查细菌的荚膜，使背景成黑色；菌体呈蓝色；而荚膜不着色，从而使荚膜包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。 酸性染料染色 墨汁染色 （五）、荧光染色法 用荧光染料进行染色检查的技术称为荧光染色法。 细菌的染色和涂片观察 第一节? 不染色标本检查法 所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌的形态及运动状况的一种检查方法。这种检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主要用于观察细菌的动力。 一、不染色标本检查法的具体方法 1 、压滴法 2、悬滴法 3、毛细管法 第二节? 染色标本检查法 所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细菌进行染色，而后再检查其形态、大小、排列方式、染色反应以及特殊结构的一种检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。 ? 细菌染色的一般程序 细菌染色的基本程序是： 涂片 → 固定 → （媒染）→ 染色 → （脱色）→（复染） 1、 涂片制备： 随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。 2、 固定： 染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常不易使染料透入细胞内）。 固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目的时也可用冷冻干燥法