H7N9实时RT-PCR检测.PDF

H7N9实时RT-PCR检测 20134 8 20134 15 为卫组织 开发该H7N9 实时RT-PCR检测 们强议亚标 应监测应对 统 GISRS 卫组织1 检测 获进步 请们联 gisrs-whohq@ 1 /influenza/gisrs_laboratory/collaborating_centres/list/en/ 卫组织 预预 1 / 5 H7N9实时RT-PCR检测 20134 15 该归设卫组织 紧态卫务 业动赢 1. 针对matrix H7N9异针 过实时RT- PCR对H7N9进检测 2. 设备 2.1 实时荧PCR检测统 2.2 适1.5ml离离 2.3 10, 200, 1000µL样枪头 2.4 漩涡荡 2.5 QIAGEN RNeasy Mini Kit 2.6 AgPath one-step RT-PCR kit 2.7 针对H7N9异针另 针对M 针检测过 卫组织 预预 2 / 5 PCR 针 编 说 H7 CNIC-H7F 5-AGAAATGAAATGGCTCCTGTCAA-3 CNIC-H7R 5- GGTTTTTTCTTGTATTTTTATATGACTTAG-3 CNIC-H7P 5FAM-AGATAATGCTGCATTCCCGCAGATG- 针 BHQ1-3 N9 CNIC-N9 5’ –TAGCAATGACACACACTAGTCAAT-3’ CNIC-N9R 5’ –ATTACCTGGATAAGGGTCATTACACT-3’ CNIC-N9P 5’FAM- AGACAATCCCCGACCGAATGACCC 针 -BHQ1-3’ FluA InfA Forward 5’ GACCRATCCTGTCACCTCTGA C 3’ InfA Reverse 5’ AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA3’ InfA Probe1 5’ FAM-TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC 针 ACG-BHQ1-3’ RnaseP RnaseP Forward 5’ AGATTTGGACCTGCGAGCG 3’ RnaseP Reverse 5’ GAGCGGCTGTCTCCACAA GT3’ RnaseP Probe1 5’FAM-TTCTGACCTGAA GGCTCTGCGCG- 针 BHQ1-3’ 说FluA and RNase /针卫组织发 预 2.8 RNase-free 1.5mL 离 RNase-free 0.2mL PCR 护镜 枪头 β 巯 70% 3. 标备 200 µL 临标500 µL结缓 应级实验进 级护 级实验进续 试剂备 标DNA检 测为污 为洁净应严洁净污单进 卫组织 预预 3 / 5 4. 步骤 4.1 步骤试剂说 级实验柜标备进 总50 µL RNA 4.2 质 阴对 标RNA时 标时 应对 RNA酶 Rnase free water 阳对 H7N9RNA 阳对 RNP 4.3 备应 (1) BSL-2设 RT-PCR试剂 针冻 (2) 备应针对离对每应 组 积 µL 5•RT-PCR master mix 12.5 40µM