布鲁菌bp26基因的表达与bp26-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制.pdfVIP

中国畜牧兽医 2013年第 4O卷第 11期 生物技术 ·21 · 布鲁菌 bp26基 因的表达与 bp26一间接 ELISA抗体 检测试剂盒的研制 常艳。王佳莹。吴云燕 ，郑仲华 ，李东升，陈金顶 (华南农业大学兽医学院，广东广州 510642) 摘要：为了研制布鲁菌bp26一间接 ELISA抗体检测试剂盒，将布鲁菌 bp26基因克隆至原核表达载体 pET-32a(+)，重组 质粒转化大肠杆菌 BI21(DE3)中诱导表达 ，以纯化后 的重组蛋 白bp26包被酶标板 ，优化 ELISA反应条件 ，组装试剂盒 。 SDS和Westernblotting分析结果表明，重组蛋白分子质量约为41ku，经 IPTG诱导后高效表达，且具有 良好的免疫原 性 ；优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为 3．6t~g／mL，血清样本的阳性临界值为 0．370；特异性试验结果表明，重组蛋 白与 牛结核菌、副猪嗜血杆菌、链球菌等多种病原体的阳性血清均无交叉反应；敏感性试验结果表明，血清稀释至 1：12800时，仍 检测为阳性；该试剂盒的批内、批间变异