生物化学.概要.pptx

沼泽红假单胞菌 PSB06 抗植物病毒蛋白 Rhp-PSP 的基因克隆与原核表达;;研究意义;高氯酸溶性蛋白是一种核糖核酸内切酶，该家族的蛋白在进化过程中广泛存在并具有高度保守性，参与调控细胞的基础生理过程。该蛋白可以在无细胞翻译体系的起始阶段发挥抑制作用。为了进一步阐明Rhp-PSP与TMV互作过程中的一些分子事件及Rhp-PSP抗TMV 的分子机制，本研究利用原核表达技术进行蛋白基因的克隆分析，为下一步研究抗病机理实验奠定基础。;;试验方法;实验方法;结果分析之总DNA提取;光合细菌 PSB06 的总 DNA 作为模板进行 16S rDNA 片段 PCR 扩增，4 个重复， 1%琼脂糖凝胶电泳检测结果均有约 1500bp 的单一目的条带。表明PCR产物特异性较高。;选择 DNA 纯化回收试剂盒直接回收 PCR 产物，回收后进行琼脂糖凝胶电泳检测结果有约 1500bp 的单一目的条带。回收 PCR 产物进行测序分析，菌株确认为沼泽红假单胞菌 。;结果分析之Rhp-psp序列的查找;Rhp-PSP 序列的电泳检测分析 ;;E1 载体是利用平末端克隆技术克隆 PCR 产物，Rhp-PSP 序列与 E1 载体连接后形 成的重组质粒，在 T1 感受态细胞中进行转化培养，得到的菌液使用 PSPF 和 PSPR 引 物进行PCR扩增和电泳检测。为平末端 连接有可能将目的片段连反，将阳性克隆菌液送去公司测序，分析测序结果，选择连接方向正确的菌液编号，进行下一步的诱导表达。;Rhp-PSP 的诱导表达;;;结论;