第十六章高效液相色谱法案例.pptVIP

2.液相色谱中速率理论 液相色谱高柱效的原因: 以特殊方法用小粒径的填料（3～5um球形）制备色谱柱 H=He+Hd+Hm+Hs+Hsm =A+B/u +Cmu+Csu+Csmu 由于溶质分子在溶剂中的扩散系数很小，纵向扩散可以忽略。 因此B项可以略去。 H=A+（Cm+Cs+Csm）u A=2λdp * 分离类型 分离原理 固定相 流动相 应用对象 液-固吸附色谱 固定相上吸附解吸 硅胶、氧化铝等固体吸附剂 不同极性的一元或多元溶剂。 不同官能团的化合物和异构体 液-液分配色谱 在固定相和流动相上分配 多孔型载体+极性或非极性固定液 与固定液极性相反 分析各种不同性质的物质 化学键 合相色谱 反相健合 与固定相缔合、解缔作用 硅胶键合非极性固定相 甲醇、乙睛-水、缓冲溶液等 分离同系物、多环芳烃等 正相健合 在固定相和流动相上分配 硅胶键合极性固定相 非极性或极性小的溶剂 分离异构体，极性不同的化合物 离子健合 反复离子交换反应 硅胶键合离子交换基团 缓冲溶液 离子化合物或有机酸碱 离子交换色谱 反复离子交换反应 载体表面涂覆离子交换树脂 酸或碱溶液 离子化合物或有机酸碱、生物物质 排阻色谱色谱 按分子大小分离。 凝胶(具有一定大小孔隙分布) 缓冲液或有机溶剂 大分子物质、测量相对分子量 * 16-9 色谱分离方法的选择 * HPLC的应用 application of HPLC 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 * 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 * 作业 p 380 16-6，16-17并指出各物质的流出顺序。 * 第16章 高效液相色谱分析法 high performance liquid chromatograph * 16-1 高效液相色谱法的特点 1. 特点：高压、高效、高速、自动化 与气相色谱比较： 适合于分子量大、高沸点、热不稳定有机及生化试样， 离子型化合物和高聚物的分离分析。 液体流动相参与分离过程，选择性高。 固定相类型多，分析选择余地大。 较低的柱温，有利于色谱分离。 液体扩散性小，纵向扩散可忽略。 试样易于制备及回收。 仪器复杂昂贵。 0.01 k＇2 (1+ k＇)2 Cm = × dp2 Dm * 16-2 高效液相色谱仪流程及主要部件 流程 组成系统：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测和记录系统 * 16-2-1 高压输液系统 （1） 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 * (2)梯度淋洗装置 内梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 外梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 梯度淋洗： 在分离过程中使用两种或两种以上不同极性的溶剂 按一定程序连续改变它们的比例，使流动相的强度、极性、pH 或离子强度相应地变化，以提高分离效果，缩短分析时间的目的。 * 16-2-2 进样系统 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： * 16-2-3 分离系统 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 * 16-2-4 检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 * b. 光电二极管阵列检测器