培养洗涤对不育症精子DNA完整性影响的实验研究.pdfVIP

中国生育健康杂志２０１３年第２４卷第６期 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｒｈ．ｏｒｇ或ｗｗｗ．ｃｊｒｈ．ｎｅｔ ５·０７ · ·生殖医学· 培养洗涤对不育症精子ＤＮＡ完整性影响的实验研究 高章圈 王淑红 赵慧芬 陈拽生 张展羽 宗文平 【摘要】 目的 观察不育症精液经培养洗涤前后精子ＤＮＡ完整性的变化。 方法 ６０例少弱精症患者精 液常规分析后分为２组，第１组采用人输卵管液（ＨＴＦ）培养洗涤，为ＨＴＦ组，另１组未经任何处理，为对照组，分别 用单细胞凝胶电泳法（ＳＣＧＥ）测定精子ＤＮＡ完整性。 结果 与对照组比较，ＨＴＦ组精液经ＨＴＦ培养洗涤后，精 子活力、活力分级（ａ＋ｂ）级均提高，精子总彗星细胞率、总彗星率较对照组降低，差异有统计学意义。 结论 该 研究对于探索精子ＤＮＡ损伤与常规指标之间的相关性、提高少弱精症在辅助生殖技术中的成功率具有实际意义。 【关键词】 不育症； 培养洗涤； 精子ＤＮＡ； 实验研究 单细胞凝胶电泳技术（ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ 高活力的ＨＴＦ培养液，３００ｇ离心１０ｍｉｎ，轻轻吸上清 ｒｅｓｉｓ，ＳＣＧＥ）对用于精子ＤＮＡ损伤的研究已有报 液弃去，留底部少量浓缩的精子液，再加适量ＨＴＦ培 道，但干扰因素较多。为探索 ＳＣＧＥ在少弱精不育 ９ 养液调整精子浓度至６００×１０／Ｌ用于ＳＣＧＥ试验。 症治疗及辅助生殖技术中的价值，采用培养洗涤法 ５试验方法：参考有关文献稍加改进进行 处理精液，收集高浓度优良精子，稀释后进行ＳＣＧＥ ＳＣＧＥ试验［３］。第１步制片，在冰冻玻片上辅１００ ｌ μ 试验，与处理前进行比较，观察不同活率和活力精子 的０７５％的正常溶点琼脂糖，在室温下静置５ｍｉｎ， ＤＮＡ的变化，报告如下。 做为底层凝胶，０５ ｌ精液与５０ ｌ的０７５％的低 μ μ 对象与方法 溶点琼脂充分混匀，并立即铺在底层凝胶上，加盖玻 １对象：２０１０年１月～２０１２年１２月来门诊就 片，静置待胶凝固后取下盖玻片，为第２层凝胶， 诊的男性不育症６０例。 ２００ ｌ的０７５％的正常溶点琼脂铺在第２层凝胶 μ ２男性不育症诊断标准［１］：结婚１年以上，同 上，加盖玻片防止ＤＮＡ在裂解和电泳时丢失，待胶 居，性生活正常、未避孕而不育，经检查属男性睾丸 凝固后取下盖玻片作为顶层凝胶。第２步精子预处 生精过程或附属性腺的功能异常者。 理玻片，在裂解液中（２５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ ３精液分析：患者禁欲４８ｈ后手淫方法留取精 ＮａＥＤＴＡ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｔｒｉｓ，ＰＨ１０，１％月桂酸肌氨 ２ 液，按《人类精液及精子宫颈粘液相互作用实验室 酸钠，１％ＴｒｉｔｏｎＸｌ００４℃）解聚精子核ＤＮＡ。第 ［２］ 检验手册》（第４版） 的精液分析方法进行分析。 ３步在水平电泳槽内 １２Ｖ、１００ｍＡ（电泳液为 ３ ４精液标本选择：精液量 １５×１０Ｌ，精子密 ≥ ３００ｎｍ