第5章现代高技术生物技术.pptVIP

二、基因工程技术和应用 将外源基因（又称目的基因，是一段 DNA 片断）组合到载体 DNA 分子中去，再把它转到受体细胞（亦称寄主细胞）中去，使外源基因在寄主细胞中增值和表达，从而得到期望的由这个外源基因所编码的蛋白质。 所以，基因工程的操作包含以下步骤： ? 获得目的基因 ? 构造重组 DNA 分子 ? 转化或转染 ? 表达 ? 蛋白质产物的分离纯化 到哪里去找目的基因？  从组织细胞中可以分离得到人/小鼠的全套基因，称为基因文库。文库中基因总数就人来说约有3万个基因。如何从中把需要的基因找出来？采取“钓”的办法。这个办法通常称为印迹法。 印迹法的关键是“分子杂交”，利用碱基配对的原则，用一段小的已知的 DNA 片断去寻找（“钓”）大的未知的基因片断。 探针 DNA 片断从何而来？ 根据目的蛋白的氨基酸序列，只要其中 N－端 15－20 个氨基酸序列，按三联密码转为 40-60 核苷酸序列，人工合成，即为探针 DNA 片断。 （2）目的基因的扩增 （3）PCR —— 把寻找目的基因和扩增目的基因两步操作并成一步。 PCR 的三个步骤为一次循环，约需5－10 分钟。每经一次循环，所找到的目的基因扩充一倍。经过 20 次循环，即可扩增 106 倍，总共只需几个小时。 （4）构造重组 DNA 分子 其次要把目的基因“装”到载体中去。“安装”的过程，需要好几种工具酶，其中关键的酶叫限制性内切酶。 此酶识别一定碱基序列，有的还可切出“粘性”末端，使得目的基因和载体的连接非常容易。 （5）转化/转染—表达—蛋白质分离 重组 DNA 分子进入寄主细胞后，其中的目的基因能否表达，表达效率高低，还有很大差别。表达通常是指目的基因编码的蛋白质合成。基因工程的最后一步，是把所获得的蛋白质分离纯化，得到蛋白质产品。 2、基因工程的应用 （2）用于提高奶酪产量 生产奶酪的凝乳酶传统上来自哺乳小牛的胃。现在可以通过基因工程办法，用酵母生产凝乳酶，大量用于奶酪制造。 （3）转基因动物和植物 转基因动物首先在小鼠获得成功。现在转基因动物技术已用于牛、羊，使得从 牛/羊 奶中可以生产蛋白质药物。称为“乳腺反应器”工程。 转基因植物亦已在大田中广为播种。 ?（4）工程菌在环境工程中应用 美国 GE 公司构造成功具有巨大烃类分解能力的工程菌，并获专利，用于清除石油污染。 1、多利羊风暴  1997．2．27  Nature （385：810－813）  英国爱丁堡罗斯林研究所  伊恩?威尔穆特小组：  多利羊 1996. 7 出生 1996. 11 收到文章 1997. 2 文章发表  文章发表，在全世界引起巨大反响。 一方面学术界高度评价 1997. 3. 2 美国华盛顿邮报 奥勒冈州沃尔小组：成功克隆两只恒河猴（96. 8出生） 1997. 3. 5台湾地区吴明杰小组：5只克隆猪。 另一方面，人们马上意识到克隆人的威胁。 政界纷纷出来表态。 1997.3.4 （美）克林顿总统宣布：禁止联邦政府资助人体克隆实验。 1997.3.5 （意）卫生部长在众议院宣布：禁止人体和动物克隆。 1997.3.11 世界卫生组织（WHO）宣布：禁止人体克隆试验。 1997.3.11 欧盟委员会宣布：反对人体克隆试验。 中国卫生部宣布：禁止人体克隆试验。 一条科学成就的宣布，在全世界范围内，在短短几十天左右时间，从学术界到经济界、政界引起巨大而深刻的反响，是空前的 。 “克隆”一词也顿时变得妇孺皆知。 2、从一个细胞到一只羊 （1）细胞分化 在个体发育中，细胞后代在形态结构和功能上发生差异的过程，称为细胞分化。 （2）细胞的发育潜能 由一个细胞可能分化发育出多少种细胞？这就是细胞的发育潜能。  大致有三种不同的发育潜能。 多能性——