影响人α—突触核蛋白基因在原核细胞中表达因素的研究.pdfVIP

维普资讯 第 33卷 第 5期 解 剖 学 报 Vo1．33．No．5 2002年 l0月 ACTA ANAT0MICA SINICA Oct．2o02 影响人 I】．【突触核蛋 白基 因在原核细胞 中 表达 因素 的研究 李淑婷 陈 彪 (首都 医科 大学 宣武 医院神 经内科实验 室 ，北 京老年 医学研 究所 ，北京 100053) [摘要] 目的 研究影响人 a一突触核蛋 白(a—synuclein)基 因在原核细胞 中表达 的常见因素 ，以提高其在原核细 胞 中的表达量 。 方法 将重组质粒 ProEXNACP转化进入 到 DH5a一大肠杆菌体 内，观察诱 导剂 IYIG浓 度 、诱导时 间 、诱导温度 、诱导培养基 、诱导初始菌浓度及诱导中 pH值变化等 因素对 蛋 白表达产量 的影响 ，用 SDS梯度 胶 电泳分析 ，考马斯亮蓝染色进行 比较研究 ，同时检测 pH值 ，观察其变化 。 结果 诱导剂 IPTG浓度对诱 导蛋 白 产生 的影响不大 ，诱导过程 中 pH值变化较小 ，而诱导时间、温度 、初始菌浓度和培养基 的种类对诱导产生 a一突触核 蛋 白有较大影 响 。其 中，以LB培养基 ，37℃，180dmin诱导 l～2h产生 a一突触核蛋 白的量最大 。 结论 诱导剂 IPTG诱导 PmExNACP／DH5a大肠杆菌产生 a一突触核蛋 白的量与诱导 时间 、温度 、初始菌浓度和培养基 的种类有 明 显 的关系 。初始菌 A =0．5～0．8，LB培养基 ，37℃，大通氧量 (180dmin以上)，l～2h诱导可作为大量提取 、纯化 a一 突触核蛋 白的首选条件 。 [关键词] a一突触核蛋 白；诱导；DH5a大肠杆菌；蛋 白表达 [中图分类号] Q753 [文献标识码] A [文章编号] 0529—1356(2002)05—492 FACToRS ASSoCL TED W ITH THE EXPRESSION OF HUM_AN ． SYNUCLEIN GENE IN PRoKARYoTIC CELLS LIShu-ting，CHENBiao’(PIUChan) (aeiji~gGeriatricInstitute，DepartmentofNeurology，XuanwuHospitalofCapitalUniversityofMedwMSciences， ，lg 100053，China) [Abstract] Objective Tostudyfactorsthatmayincreasetheexpressionofhumana—synucleingeneinprokaryoticceNs． M ethods proEXNACP vectorwastransferred intocompetencecells．FactorssuchasIPTG levels，initialconcentrationofceNs， type andpH ofmedia．timeandtemperatureofinductionwerestudied inrelationtotheproductionofa—synuclein．Results IPTG concentration andpH changedoesnothaveasignificance impactona—synucleinproduction．Butthetimeand temperature ofin— duction，mediaandinitial concentration ofcellssing