可转化大片段DNA载体系统及其在花生育种中的应用前景.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（５）：１２８～１３４ 可转化大片段ＤＮＡ载体系统及其在 花生育种中的应用前景 １ １ ２ １ １ 夏　晗 　李爱芹 　卢金东 　毕玉平 　王兴军 （１山东省农业科学院高新技术研究中心 山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室　济南　２５０１００） （２山东省农业科学院蔬菜研究所　济南　２５０１００） 摘要　可转化大片段 ＤＮＡ载体系统主要包括双元细菌人工染色体 ＢＩＢＡＣ（ｂｉｎａｒｙｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）和可转化人工染色体ＴＡＣ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ－ｃｏｍｐｅｔｅｎｔａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）系 统，它们能够高效克隆大片段ＤＮＡ，在获取目的基因相关信息的同时转化植物得到转基因植株。 综述了ＢＩＢＡＣ和ＴＡＣ载体的特点、种类、发展现状以及近年来在植物种质创新中的应用。根据 我国花生育种的现状，展望了可转化大片段ＤＮＡ载体系统在利用野生花生资源改良栽培花生品 种中的应用前景。 关键词　花生　双元细菌人工染色体　可转化人工染色体　分子育种 中图分类号　Ｑ７８９ 　　随着分子生物学的发展，根据基因克隆和转化、基 Ｐ１ｓ等细菌人工染色体载体系统，这些载体成为基因组 ［３］ 因组文库构建及基因组全序列测定等研究的需要， 测序、遗传图谱和物理图谱构建的主要工具 。第三 ＤＮＡ片段克隆和表达载体不断更新和改善，其发展历 代载体系统的主要特点是将基因组文库的构建和分子 史大致可划分为３个阶段：第一代载体系统主要有质 育种相结合，能够在文库中筛选出有益基因进行功能 分析的同时转化植物。 ［４］ 粒（ｐｌａｓｍｉｄ），粘粒（ｃｏｓｍｉｄ），噬菌体等，它们的特点是 １９９６年，Ｈａｍｉｌｔｏｎ等 构建了 ［１］ 双元ＢＡＣ载体（ＢｉｎａｒｙＢＡＣ，ＢＩＢＡＣｓ），该载体含有大 操作简单，携带的ＤＮＡ片段较小 ，一般小于５０ｋｂ， 只适用于一般基因的克隆和ｃＤＮＡ文库的构建等工作。 肠杆菌Ｆ因子和发根农杆菌Ｒｉ质粒的复制子，能在大 以酵母人工染色体（ｙｅａｓｔａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＹＡＣ）， 肠杆菌和根癌农杆菌中以单拷贝形式复制。１９９９年， ［５］ 细菌人工染色体（ｂａｃｔｅｒｉａｌａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＢＡＣ） Ｌｉｕ等 结合 ＰＡＣ载体和双元载体的特点，构建了植 物可转 化 人 工 染 色体 （Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ 和Ｐ１人工染色体（Ｐ１ｄｅｒｉｖｅｄａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ， ? ? ＰＡＣ）等为代表的第二代载体系统主要特点是能携带 ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＴＡＣ）载体，ＴＡＣ载体中的Ｐｌ裂 ＤＮＡ大片段，携带的ＤＮＡ片段长度从几十到几千 ｋｂ 解复制子可被ＩＰＴＧ诱导产生多拷贝，有利于质粒ＤＮＡ 不等，多用来构建高等生物的基因组文库。ＹＡＣ文库 的提取和文库筛选。本文主要综述了近年来可转化大 为第一代人类基因组物理图谱的绘制作出了贡献［２］； 片段ＤＮＡ载体系统的发展和应用，并展望其在花生育 种中的应用前景。 ＢＡＣ载体克服了ＹＡＣ载