亚洲棉石系亚1号耐旱相关基因SSH文库的构建及其分析.PDFVIP

棉花 学 报 Cotton Science 2010 22 渊2 冤院110~ 114 洲棉石系 1 号耐旱相关基因SSH 文库的构建及其分析 * 张玲 李付广 刘传亮 朝军 武芝霞 国农业科学院棉花研究所/ 农业部棉花遗传改良重点实验室袁河南安阳455000 冤 摘要: 通过抑制消减杂交技术成功地构建了亚洲棉石系亚1 号耐旱相关基因cDNA 文库遥 通过蓝白斑筛选尧 菌落PCR 及生物信息学等分子生物学手段分析和检验了库的质量袁最终筛选出阳性克隆392 个遥 通过EST 测 序得到265 个单一序列袁其 41 个为重叠群袁224 个为单拷贝遥 生物信息学分析结果表明袁该文库含有大量与 耐旱相关的基因袁并且涉及植物生理 多种代谢途径遥 关键词院亚洲棉曰干旱胁迫曰抑制性消减杂交 中图分类号院S562.035.3 文献标识码院A 文章编号院1002-7807渊2010冤02-0 110-05 * ZHANG Ling, LI Fu-guang , LIU Chuan-liang, ZHANG Chao-jun, WU Zhi-xia 渊 455000, 冤 This study constructed high quality drought-related cDNA library of cotton ( L.) by SSH success- fully; it was checked and analyzed by Blue-white bolting, colony PCR, and bioinformatics. Finally, 392 positive clones were ob- tained. After cluster analysis of the ESTs sequences, 265 unigenes were obtained, including 4 1 contigs and 224 singlets. A large group of drought stress-induced genes were found in the cDNA library, which involved in many metabolism pathways. L; drought stress; SSH 干旱是限制棉花生长发育的重要环境因子 试验方法 之一遥 目前 耐旱棉花品种主要是通过常规育种 选取 17 PEG 6000 处理的 方法获得 但该方法存在着周期长尧工作量大尧 3~6 叶期生长旺盛的整株棉花幼苗作为实验材 选择效率不高等问题遥 因此 从分子水平上阐明 料 同时用未处理的棉花做对照方 具体方法参照 棉花耐旱性的物质基础及其生理功能 并通过 文献[1-2]遥 基因工程手段培育耐旱棉花新品种渊系冤 将是 采用 解决棉花耐旱问题的重要途径遥 改良的CTAB 法提取分离棉花总RNA 并利用 OligotexTM mRNA Mini Kit 分离纯化mRNA 渊QI- 材料和方法 AGEN 冤遥 供试材料 抑制性消