2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体研究.ppt

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 人-鼠(想像图) 资料: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合？ 动物细胞A 动物细胞B 诱导、融合 杂合的细胞 有丝分裂 2个完整的杂交细胞AB 植物细胞A 植物细胞B 去掉细胞壁 去掉细胞壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂 分化发育 愈伤组织 杂种植株 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 物理法 化学法 生物法 （离心、振动、电刺激） 聚乙二醇（PEG） 　灭活的病毒（灭活的仙台病毒） (一)动物细胞融合 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性 3、诱导方式 1、概念： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 生物法： 灭活的病毒 （P52 生物技术资料卡） 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原 理 融合前处理 诱 导 方 法 用 途 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去壁，并使细胞分散 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 4、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？ 打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ 4、抗体的分布？ （二）单克隆抗体的制备 1、抗体的传统生产方法 再从动物血清中分离抗体 该法制备抗体的不足： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 输入 浆细胞 动物体内 某抗体 某抗原 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 创始人：米尔斯坦 一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖 杂交瘤细胞 既能分泌一种 特异性抗体 又能无限增殖 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想： 思考与探究： 如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？ B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 单克隆抗体的制备过程 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 专一抗体检验阳性 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 结合单克隆抗体的制备过程，思考以下问题： 1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、本过程利用的那些技术？ 4、杂交瘤细胞有何特点？ 单克隆抗体的应用信息 特点：特异性强、纯度高、灵敏度高， 产量大、容易标准化生产。 ①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） 优点： 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体的应用 单克隆抗体的应用 ②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，如单克隆抗体+药物= “生物导弹”） 优点： 位置准确、疗效高、副作用小 有梦想，才会有创造！ 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。 想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。 生物种间杂交想像图 单克隆抗体 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 选择 培养 杂交瘤 细胞 克隆化 培养 抗体 检测 产生所需抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 多种杂 交细胞 1、该过程中用到了两种技术 小结 单克隆抗体的制备过程： 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 2、单克隆抗体的制备过程的三个“一”： 一种诱导细胞融合的新方法，产生了一种新细胞，得到了一种优势抗体。 灭活病毒诱导融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 优势：特异性强、灵敏度高， 可大量制备 * *