AAC法处理番茄酱废水过程中微生物总DNA的提取及扩增条件的试卷.doc

AAC法处理番茄酱废水过程中微生物总DNA的提取及扩增条件的研究  目 录 目 录………………………………………………………………………………….1 摘 要……………………………………………………………………………………3 Abstract ………………………………………………………………………………………………… 1. 文献综述………………………………………………………………………………... 1. 1 前言…………………………………………………………………………………….. 1. 2 研究目的和意义…………………………………………………………………….. 1. 3 国内外的相关发展…… ………………………………………………………. 1. 4 课题背景…………………………………………………………………….. 2. 实验材料与实验方法……………………………………………….. 2.1 实验材料 …………………………………………………………………….. 2. 1. 1 实验试剂…………………………………………………………… 2. 1 .2 实验仪器设备………………………………………………………………. 2. 2 实验方法……………………………………………………………………….. 3. 实验内容……………………………………………………………………………. 3. 1 模拟反应器的设计、简介……….……………………………………………… 3. 2 DNA提取…………………………………………………………………………. 3. 2. 1 酚/氯仿抽提法………………………………………………….. 3. 2. 2 改进的SDS法……………. 3. 2. 3 Reddy法…………………………………………………….. 3. 2. 4 试剂盒法……………………………………………………………………… 3. 3 DNA检测………………………………………………………………………. 3. 3. 1 琼脂糖凝胶电泳检测DNA量…………………………………………………….. 3. 3. 2 紫外可见分光光度计检测ＤＮＡ纯度以及浓度………………………………. 3. 4 PCR检测… ……………………………………………………………………… 4 结果与讨论……………………………………………………………………………….. 4.1 结果………………………………………………………………………………….. 4.2 讨论…………………………………………………………………………………….. 参考文献………………………………………………………… 致 谢…………………………………………………………………….. 附 件……………………………………………………………. 摘要 本实验中我们采用4种DNA提取方法对AAC法处理番茄酱废水过程中微生物的总DNA进行了提取，并对4种提取方法的DNA提取效果进行综合分析，发现Reddy法提取出的DNA量最多，酚仿抽提法提取出的DNA量最少，但是考虑到提取时间和提取所用的试剂和药品，改进的SDS法最好，它不但提取时间较短，所需费用较低，而且提取效果也不错。 在下一步的扩增中，我们对DNA中的细菌16S r DNA片断进行了多次PCR扩增，得到了合适的扩增条件：95℃，2min；95℃,45s；50℃，45s；72℃，90s，30cycles；72℃,10min。PCR反应体系为ddH2O12.5μL,10×PCR反应缓冲液2.5μL，25.0mmol/L MgCl2溶液1.5μL,2.5mmol/L dNTP 溶液2μL，2.0μmol/ L引物P1、P2各2.5μL，Taq聚合酶0.5个单位,样品DNA 溶液2μL。 关键词：AAC 番茄酱 DNA的提取 PCR Abstract The effectives of four DNA extraction methods for isolation of the total microbial DNA from tomato juice wastewater were compared. The four methods were evaluated comprehensively for several factors .The results showed that Reddy method could obtain the highest DNA yield, phenol/chloroform method provided the lowest DNA yield. However, 但是考虑到提取时间和提取所用的试剂和药品，改进的SDS法最好，它