生化chapter0307aminoacidsandproteins2.pptVIP

* * * 氨基酸的释放量（摩尔数） 反应时间 Gly Ser Val 判断序列 -Val-Ser-Gly-COOH ②羧肽酶水解法 3.2.3 C-末端氨基酸测定 最普遍的方法是用过量的巯基乙醇处理，然后用碘乙酸保护还原时生成的半胱氨酸巯基，以防它重新被氧化。 二硫键拆开后形成的个别肽链，可能用纸层析、离子交换柱层析、逆流分溶、区带电泳等方法进行分离。 3.2.4 二硫键拆开和肽链分离 SH +SH S S HOCH2CH2SH ICH2COOH 涉及反应 pH8.0~9.0,室温 S CH2COO 3.2.4 二硫键拆开和肽链分离 ①化学法 有溴化氰法、部分酸水解法、羟胺法和N-溴代琥珀酰亚胺法等。 ②酶解法 有较强专一性，水解产率也较高。 常用的酶有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和嗜热菌蛋白酶等。 处理后得到的肽段，主要通过凝胶过滤法分离，常辅以离子交换层析法。 3.2.5 肽链部分水解和分离 ①主要是Edman降解法。P. Edman于1950年首先提出。 Edman降解试剂（PITC）与多肽链的游离末端氨基作用，降解反应分偶联、环化断裂和转化三个步骤。 3.2.6 肽段氨基酸顺序测定 ②酶解法 主要是肽谱重迭法，是在化学法所得结果的前期下进行的氨基酸序列分析。 测定多肽链中分离出来的各个小肽段，可以应用化学方法或酶学方法测出其中的氨