临床医学专业病原生物学实验.ppt

* * * * * * 革兰染色的意义： 1.将细菌分成两大类。 2.分析细菌的致病性。 3.临床药物的选择。 注意事项： 细菌涂片、干燥、固定 初染： 结晶紫 1分钟 甩干 媒染： 卢戈氏碘液 1分钟 甩干 脱色： 95%酒精 20秒 甩干 复染： 石炭酸复红 20秒 吸干 油镜观察 水洗 水洗 水洗 水洗 一、消毒灭菌 掌握消毒、灭菌、无菌的概念。 目的：掌握常用的物理消毒灭菌方法。 方法： 1.煮沸法：（目的：煮沸原理、细菌在液体培养基中的生长情 况） [原理]：水温100℃维持10分钟可杀死细菌的繁殖体，细菌的芽 胞需煮沸1-2小时才杀灭。常用于消毒食具、刀剪、 注射器等。 ［步骤］：（四个人一个小组） 1）材料：大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液（含芽胞）、肉汤培 养基、接种环、酒精灯、水浴箱、 2）取四根肉汤培养管，分别用A、B、C、D编号。 3）右手持接种环灭菌冷却后挑取单一菌落，左手持肉汤培 养基与桌面呈45°，用左手的小指与小鱼际肌拔取试管 塞，将管口通过火焰旋转烧灼；然后将沾有细菌的接种 环移入肉汤培养基中，于液面相对的那一侧管壁并接近 液面处研磨，沾取少许液体肉汤与之调和，使菌液混于 培养基中。（用上述方法将细菌分别接种到A、B、C、D 试管中） 4）将上述的B、C两管用试管夹夹着放置100℃沸水中煮沸10 分钟。 5）10分钟后，将A、B、C、D 四管置37℃温箱培养24小时， 观察结果 。 液体接种法 A B C D 枯草杆菌 大肠杆菌 100度水浴10分钟 100℃ 5min 100℃ 5min 37℃ 24h 菌膜 澄清 浑浊 试验管 枯草杆菌 大肠杆菌 实 验 四 【内容】： 1.物理、化学因素对细菌的影响 2.肠道细菌的生化试验 【目的】： 1.掌握紫外线消毒灭菌的原理及适用范围。 2.掌握纸片法药敏试验的原理及结果判断。 3.掌握鉴别肠道细菌的常用试验及其原理、结果判断。 二.紫外线法： [原理]：波长200-300nm的紫外线与DNA吸收波峰一样，尤其 265-266nm的杀菌作用最强，易被细菌DNA吸收，导 致细菌的死亡。但紫外线的穿透力弱，玻璃、纸张、 尘埃等均能阻挡，故只能适用于直接照射物体表面 与空气的消毒，而且对人的皮肤、眼睛有损伤作用。 同时紫外线消毒有光复活效应。 [方法]： 1.材料：普通琼脂平板、大肠杆菌菌种、接种环、镊子、 黑纸片、人工紫外灯、酒精灯等。 2.点燃酒精灯，在无菌操作下，用烧灼灭菌过的接种环挑取大 肠杆菌菌落，在普通琼脂平板上交叉密集划线。 3.在无菌操作下，用无菌镊子夹取黑纸片一张， 半启皿盖，将黑纸片放在中央，黑色朝上， 并用无菌镊子轻压黑纸片四角，使它贴紧平 板，然后盖上皿盖。 4.将上述平板放在无菌操作台上，全开皿盖，在 人工紫外灯下照射30分钟。 5.30分钟后，无菌操作下，在无菌操作台内用无 菌镊子夹出黑纸片，盖上皿盖，皿底朝上置 37℃温箱培养24小时，观察结果。 三、抗生素敏感试验 1.常用的方法有琼脂扩散法和连续稀释法。临床工作中 常用标准纸片琼脂扩散法，即K-B法。 2.原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中的药物便不断向纸片周围区域扩 散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围 内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈 的直径大小反映测试菌对该药物的敏感性程度，并与 该药物对测试菌的MIC呈负相关，即抑菌圈直径越大， MIC值越小。该方法是定性试验，可用于选择敏感药物 及评估药物的抗菌谱。 3.结果判断：常用三级划分制，即敏感、中度敏感、耐药 ［步骤］：（两个人一组） 1.材料：葡萄球菌和大肠杆菌菌液、固体琼脂平板、无菌棉签、 酒精灯、各种抗生素滤纸片、镊子等。 2.方法： ⑴两个同学一组，其中一个同学用连续交叉划线的方法将葡萄 球菌用无菌操作技术接种到琼脂平板上，另一同学用同样方法接种大肠杆菌。 ⑵用无菌镊子取4种不同的抗生素滤纸片，放于上述接种完细 菌的培养基表面上。（注意两两抗生素滤纸片之间距离不小 于2cm，纸片与平皿边缘距离不小于1cm）并在平皿底部作上 标记。 ⑶平皿底朝上放在37℃温箱中培养24小时后，用尺子测量各抑 菌圈的直径，并分析结果。 抗 生