第十章RNA的生物合成技术总结.pptVIP

第十章RNA的生物合成 学习目标 掌握：转录的概念；转录的不对称性；原核生物 RNA 聚合酶的组成和各亚基的功能。 熟悉： 熟悉真核生物RNA 聚合酶的类型与功能，结构基因、模板链和编码链的含义；几种RNA转录后加工修饰；核酶概念。 了解：转录的特点；RNA 转录过程。 反应体系： DNA模板,NTP,酶，Mg2+,Mn2+， 合成方向5‘→3’ 。 连接方式---3,5磷酸二酯键 原料： 四种磷酸核苷NTP， DNA中的T在RNA合成中变为U。 合成过程: 连续，方向：5→3 合成部位：细胞核内 二、RNA聚合酶 定义： 以DNA为模板，催化三磷酸核苷（NTP）聚合形成RNA的酶 常称为转录酶。 全称为 ：DNA依赖的 RNA聚合酶（DDRP） 作用特点： 1. DNA为模板。 2. 不需引物，两游离NTP或一游离NTP与RNA链聚合。 3. 3-OH与5-P聚合形成磷酸二酯键。 4.方向：5→3。 一）原核生物的RNA聚合酶 组成：RNA聚合酶由5个亚基构成，α2ββ? σ为全酶，α2ββ?为核心酶 作用：识别DNA分子中转录的起始部位。促进与模板链结合，并使DNA双链打开17bp。催化NTP的聚合，完成一条RNA链的聚合反应。识别转录终止信号，停止聚合反应，参与转录水平的调控。 α2ββ(核心酶) 二)真核RNA聚合酶 真核较原核的酶复杂，已清楚的有RNA PolⅠ,Ⅱ,Ⅲ及Mt四型 组成和功能：均由多亚基构成，聚合酶Ⅱ主要负责mRNA的合成； PolⅠ主要负责rRNA的合成； PolⅢ主要负责tRNA和5srRNA的合成。 四、 转录的特点 1. 不对称性：双链DNA分子中一条链转录时，另一条链不被转录，这一现象称为不对称转录。 2. 连续性：RNA的转录不需要引物，从起始位点开始到终止位点为止，连续合成RNA链。 3. 单向性：模板链的方向是3′→5′，聚合时RNA链是沿5′→3′方向延伸。 4. 有特定的起始和终止位点 ρ因子 1.依赖 Rho因子的转录终止： 具有控制转录终止作用的蛋白质因子。  机制：Rho因子与RNA3? -OH的poly C结合， 抑制聚合酶活性，激活解螺旋活性。 2. 非依赖 Rho因子的转录终止： DNA模板近终止处，有特殊的碱基序列，转录出RNA产物形成特殊的结构终止转录。 发夹结构：反向碱基互补序列。 末端PolyU：U:A不稳定。 复制和转录的不同点 一、mRNA的转录后加工 1. 5?端形成 帽子结构 (m7GpppGp—) 7-甲基鸟嘌呤-三磷酸鸟苷 帽子结构的生成： 帽子结构的功能: 核内生成, 保护mRNA不被核酸外切酶水解。 与翻译过程有关，帽子结构结合蛋白是翻译起始必需的因子。 3. mRNA的剪接 hnRNA被剪接体作用，剪除内含子、连接外显子，产生成熟的mRNA的过程 剪接:在细胞核内, hnRNA剪切掉内含子,将多个外显子连接为成熟mRNA的过程为剪接 剪接的本质：磷酸酯键的转移 剪接特点：剪接部位的结构为内含子末端的特定序列，分布在内含子的三个部位，5?端剪切点为GU；3?端剪切点为AG；靠近3?端含A序列的分支点 ☆ 内含子：（基因上的非编码序列） 在断裂基因及其初级转录产物上出现，而在剪接过程中被除去的核酸序列。 4. 碱基的修饰 mRNA分子内含有少量稀有碱基，例如甲基化碱基是转录后经过甲基化修饰后形成。 二、tRNA转录后的加工 1.修剪和剪接 5?-端和3? -端要通过修剪才能成熟。 2.添加CCA序列 tRNA必须有3?-CCA-OH末端才有活性。 3.碱基修饰 成熟的tRNA分子中包含许多修饰成分， 而且不同的tRNA修饰的内容和数目都不同。 （1）甲基化 如：A ? Am （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ?ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 三、rRNA转录后的加工 1、剪切作用： 需核酸酶参与，将前体切到一定长度。 2、甲基化修饰： 修饰在碱基上。 3、自我剪接： 一种核酶的作用。插入顺序 的去除，这是一个自我催化完成的过程。 四、RNA的编辑 概念 mRNA转录后出现核苷酸的替换，插入或缺失，改变DNA模板来源的遗传信息，翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。 生物学意义 产生多种表达产物，产生多种生物学效应，产