液相色谱应用_方法开发_R130326.pdfVIP

液相色谱应用液相色谱应用 液相色谱应用液相色谱应用 -方法开发- 方法开发 -- 方法开发方法开发 液相色谱的应用液相色谱的应用 （一（一）） 液相色谱的应用液相色谱的应用 （（一一）） “分析型液相色谱”：定性及定量分析 ∗ 灵敏度的要求 ∗ 样品的复杂性 ∗ 样品量的要求 ∗ 精度及准确度的要求 ∗ 容易使用 液相色谱的应用液相色谱的应用 （二（二）） 液相色谱的应用液相色谱的应用 （（二二）） “制备型液相色谱”：分离及纯化 ∗ 化合物的稳定性 ∗ 样品的复杂性 ∗ 制备量的要求 ∗ 纯度的要求，及纯度的鉴定 ∗ 方法的安全性 开发液相色谱方法开发液相色谱方法 开发液相色谱方法开发液相色谱方法 分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时 ，有很多因素是很重要的。除分辨率之 外，以下几个因素都要考虑。 ∗ 灵敏度 ∗ 载样量 ∗ 分析速度 ∗ 溶剂损耗成本 ∗ 容易使用 ∗ 色谱柱寿命 ∗ 效率 色谱条件的优化色谱条件的优化 色谱条件的优化色谱条件的优化 分离度 速 度 容 量 分析型分析型 制备型制备型 分析型分析型 制备型制备型 分离度分离度 容 量容 量 分离度分离度 容 量容 量 速 度速 度 速 度速 度 速 度速 度 速 度速 度 第一步干什么第一步干什么?? 第一步干什么第一步干什么?? 想办法得到各种信息 ∗ 向同行了解是否做过此类样品，或有否类似样品的分 析方法 ∗ 查文献，如CA(化学文摘) ∗ 仪器制造商的文献 ，如Agilent 、Waters 对色谱柱有足够的了解 ∗ 掌握分离机理，自己开发方法 充分了解您自己的样品 分析时要了解哪方面的情况分析时要了解哪方面的情况？？ 分析时要了解哪方面的情况分析时要了解哪方面的情况？？ 灵敏度的要求有多高? 样品的本底是否很复杂? 有多少组份要分析? 对分析的精确度、准确度等有多高要求? 是否因是日常检验 ，而要求方法容易使用? 分离时要了解哪方面的情况分离时要了解哪方面的情况？？ 分离时要了解哪方面的情况分离时要了解哪方面的情况？？ 要分离 （即制备）的样品量有多大? 要分离的组份在样品中的含量很高? 还是微量? 是否需要保持生物活性? 对分离产物纯度的要求有多高? 纯度或活性的鉴定如何完成? 一般的具体步骤一般的具体步骤 一般的具体步骤一般的具体步骤 先用一根短的色谱柱 用相对较高的流速 使用尽可能纯度高的标准品 请记住请记住 ∶∶ 请记住请记住 ∶∶ 先用高强度的洗脱液 每次改变一个参数 每次改变一个参数 每次改变一个参数 每次改变一个参