镜检实验室技术..pptVIP

疟疾镜检实验室技术太和县疾病预防控制中心2012.5.20 血片制作、染色所需器材 1.载玻片：玻片使用前应清洗干净，以防血膜脱落。 ①新玻片应先浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，凉干，最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。 ②已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水中1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，逐个擦去玻片上旧的血膜痕迹，用清水漂洗干净，再将玻片擦干擦亮。洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 血片制作所需器材 2.采血针：使用一次性釆血针。 3.75％乙醇棉球：用于采血前后的消毒。 4.记号笔：用于玻片上书写号码。 5.玻片盒：防止污染和蝇、虫吸食血膜。 6.无水甲醇：固定薄血膜。 7.二甲苯 或无水乙醇3份与乙醚7份的混合液：用于血片和镜头脱油。 8.姬氏或瑞氏染液 采血部位及取血方法 以耳垂采血较为合适，也可采手指末端血，婴儿可从拇趾或足跟取血。 。 用75%酒精棉球消毒采血部位，待酒精干后，左手拇指和食指紧捏采血部位两侧，右手持一次性采血针迅速刺入1－2毫米深，轻轻挤出血滴 ，涂制血膜 。 采血的血量 涂制厚血膜：血量约为4－5μl (如小火柴头大小血量)，涂成直径约0.8—1.0cm 圆形厚血膜。血膜厚度以1个油镜视野可见5－10个白细胞为宜。 涂制薄血膜血量：只需血液1~1.5μl ，约厚血膜的1/3-1/4血量），薄血膜涂成宽约2cm，长约2.5cm的舌状血膜。 厚、薄血膜的形状和位置 厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。薄血膜宽2cm，长2.5cm. 厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 薄血膜位置：位于玻片1/2～1/3处。 薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕。呈轻微黄白色，可看到书报字体。 厚、薄血膜的大小位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图 厚薄血膜的位置 标准的疟疾厚薄血膜片位置 厚血膜涂制方法 取洁净玻片2张，1张做载片，1张做推片，推片边缘要光滑，载玻片放桌上，右手拇指和食指持推片二侧，以推片左端下角刮取1小滴血(小火柴头大小），在载玻片1/3处， 涂成直径0.8－1.0厘米厚血膜。涂毕后用干棉球擦净耳垂上和推片上残留血渍。 薄血膜涂制方法 以推片左端中部刮取1－1.5ul血液，然后将血液端推片平抵载玻片，略加实压，使血液向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°一35°角，从右向左迅速推成薄血膜。推时速度快慢、血滴大小和角度均影响血膜的厚薄程度。最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布排列比较均匀。无裂缝，无空隙。 正确的推片姿势 血片的编号 待血膜自然干燥后，用铅笔将受检者号码写在薄血膜上，这样号码不易脱落。 血片编号也可根据实际需要进行操作。 血片的固定与厚膜溶血 薄血膜先用无水甲醇或无水乙醇固定，厚血膜不能固定，即不能接触甲醇或酒精。 厚血膜可以直接用吉氏染色，不需要先溶血。但瑞氏染色，厚血膜一定要先溶血再染色 未处理血膜放置时间 夏天一般不易超过48小时，冬天不易超过72小时，否则厚血膜会自然固定而不能溶血，影响镜检。 不能及时染色的血膜，可先用甲醇固定薄血膜，将厚血膜溶血，晾干后包好，放入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温中1~2小时后取出血片。 间日疟－采血的时间 间日疟什么时间检查,都能查到疟原虫，但在发作数小时至十余小时后，疟原虫发育到大滋养体或裂殖体时更以查到。 在患者发热初期，查血往往可看到较多环状体、裂殖体，也可见到大滋养体和配子体。 间日疟原虫在患者刚发冷发热后不久，大部是在小滋养体期，即环状体期，故这一时期可能区别疟原虫种类是不太容易的。 恶性疟－采血的时间 外周血恶性疟原虫可见到的环状体和配子体。环状体在外周血液中经10几个小时的发育后，逐渐隐匿于微血管、血窦等内脏的毛细血管内，继续发育成大滋养体及裂殖体，所以，这两个时期在外周血液中一般不易见到。 故较理想的取血时间，是在发作后的10－15小时。因为这个时候，环状滋养体发育到最高峰，但尚进入内脏毛细血管中发育。 恶性疟环状体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。恶性疟原虫的配子体很易识别，但在初发时，一般需要在发作7－10日后才能在末稍血液中出现，应当注意。 染色剂的选择 疟原虫镜检常用的染色方法有吉氏染色和瑞氏染色，推荐使用吉氏染液。①吉氏染剂较适用于厚血膜和批量血膜的染色；②染色效果稳定，吉氏染色后的血膜保存时间较长，疟原虫不宜退色。③吉氏染剂能长期保存而不变质。④染色技术易掌握。 染色方法 固定薄血膜：要用甲醇或无水乙醇； 瑞氏染色