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卫生检验学实习指导 自编教材 公共卫生实验教学中心 2007.3 1 目 录 实验一 邻二氮菲比色法测定微量铁 1 实验二 荧光法测定尿中核黄素 （VB2 ）含量 4 实验三 火焰原子吸收分光光度法测定尿中微量锌 7 实验四 离子选择性电极法测定水中氟离子浓度 9 实验五 电导法测定水的纯度 12 实验六 气相色谱法测定苯系物 14 实验七 高效液相色谱法测定尿中马尿酸和甲基马尿酸 17 实验八 饮用水的卫生细菌学检查 19 实验九 变质食品中蜡样芽胞杆菌的检测 25 实验十 空气细菌学检验 29 实验十一 化妆品中铜绿假单胞菌检测 31 实验十二 粮食中真菌的检测 34 2 实验一 邻二氮菲比色法测定微量铁 【目的与要求】 1.掌握可见分光光度法分析条件选择的方法。 2.熟悉分光光度计的使用方法。 3. 了解用邻二氮菲测定微星铁的原理。 【原理】 邻二氮菲是测定微量铁的一种优良显色剂。在pH= 3-9(一般控制pH=5-6)的 溶液中，邻二氮菲与Fe2+作用生成橙红色配合物，其lgK 稳=21.3 ，最大吸收波长 4 2+ 为 510nm,摩尔吸光系数为 1.1×10 。在一定浓度范围内，Fe 的浓度与吸光度符 合比尔定律。 样品中若有Fe3+ ，可用还原剂 （常用盐酸羟胺）将其还原成Fe2+ ．此时测定 的是总铁含量。 本法的选择性高。邻二氮菲与Fe2+ 的反应和其他显色反应一样，会受到显色 剂浓度、溶液酸度、反应温度、显色时间等因素的影响。为了得到最佳的测定灵 敏度、精密度和准确度．必须对上述影响因素进行实验，以选择最佳的分析条件。 【仪器与试剂】 1.仪器与器皿 分光光度计；1 cm 吸收池；酸度计；l ml、 2m1 、5ml 刻度 吸管；25ml 容量瓶。 2.试剂 -3 1. 000×10 mol/L 的铁标准溶液：准确称取0.4822g 分析纯硫酸铁铵置于小烧 杯中，加人约80ml 盐酸 （1+1）和少量去离子水，溶解后转移至1000m1 容量瓶 中，用去离子水稀释至标线，摇匀。 1.5g/L 邻二氮菲：称取0.15g 分析纯邻二氮菲，先用少量无水乙醇溶解，再 用去离子水稀释至l00ml，贮于塑料瓶中。 100g/L 盐酸羟胺溶液。 1mol/L 醋酸钠溶液。 0.1mol/L 氢氧化钠溶液。 【操作步骤】 1 1. 吸收曲线的绘制 取 2 个 25ml 容量瓶，分别加人 0.00 、 1.00ml 1. -3 000×10 mol/L 的铁标准溶液, 0.5ml 100g/L 盐酸羟胺溶液，摇匀后加人lml 1.5g/L 邻二氮菲溶液，2.5ml 1mol/L 醋酸钠溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀。用1cm 吸收池，以未加人铁标准溶液的试剂空白溶液为参比，在分光光度计上从波长 440nm 至560nm 每隔5nm 测一次吸光度，在最大吸收波长附近每隔2nm 测一次 吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。从曲线上找出最 大吸收波长，并计算在该波长处的摩尔吸光系数。 2.显色剂浓度的影响 取 6 个 25 ml 容量瓶，分别加人 1. 00ml 1. 000× -3 10 mol/L 的铁标准溶液，0.5ml 100g/L 盐酸羟胺溶液，摇匀后加人0.00、0.10、 0.25、0.50、1.00、2. 00ml 1.5g/L 邻二氮菲溶液，各加入2.5ml 1mol/L 醋酸钠溶 液，用去离子水定容至刻度，摇匀。以未