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上海交通大学博士论文 乙酰肝素酶对口腔黏膜恶性黑色素瘤 生物学行为的影响 摘要 背景： 口腔黏膜恶性黑色素瘤是一种少见的恶性程度极高的肿瘤，预后较差，患者主 要死亡原因为局部侵袭及远处转移。与皮肤恶性黑色素瘤相比，口腔黏膜恶性黑色 素瘤好发种族不同，恶性程度更高，有着不同的病因和发病机制，目前针对口腔黏 膜恶性黑色素瘤的研究很少。局部侵袭及远处转移是口腔黏膜恶性黑色素瘤重要的 预后指标，因而阐明口腔黏膜恶性黑色素瘤局部侵袭及远处转移的机制将有助于口 腔黏膜恶性黑色素瘤患者的诊断和治疗。 membrane，呦中多糖的酶，在肿瘤浸润和转移中发 matrix，ECM)和基底膜(basement 挥重要作用。头颈部恶性肿瘤细胞要实现侵袭和转移，必须穿过E锄及础进入循环， 在这个过程中ECM各种成分的降解是必不可少的。最近有研究显示在胰腺癌、舌癌、 神经胶质瘤、胃癌及前列腺癌等多种人类肿瘤中均发现了HPA的存在，并均与癌细胞 的浸润和转移有关。乙酰肝素酶对口腔黏膜恶性黑色素瘤生物学行为的影响，目前 国内外很少有报道。对乙酰肝素酶基因进行干扰使肿瘤细胞生物学行为发生改变， 并进一步在体内外研究乙酰肝素酶靶向抑制剂抗肿瘤的效果，可以为肿瘤的治疗提 供新的靶点。 目的： 观察乙酰肝素酶对口腔黏膜恶性黑色素瘤生物学行为的影响，为口腔黏膜恶性 黑色素瘤临床分子靶向治疗提供基础。 方法： 者，采用病例回顾及生存率分析的方法研究影响口腔黏膜恶性黑色素瘤患者预后的 相关因素。 2、运用RT_PCR及Westernblot技术观察口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞系(皿细胞系) HPA的表达；采用免疫组化技术检测口腔黏膜恶性黑色素瘤石蜡标本职A的表达，并 分析其与患者临床病理特征以及生存率等预后指标的相关性。 3、采用质粒转染和RNA干扰技术，建立稳定的高表达及低表达HPA的膻细胞。高表达 低表达耶A对肛细胞的增殖、侵袭、以及体内成瘤等生物学特性的影响。在体外，用 此，ME-hpa和ME-sh烈A细胞的侵袭能力。在体内，用裸鼠皮下注射成瘤的方法观察 ME，ME-hpa和ME-sh烈A细胞的成瘤能力，及体内转移侵袭能力。 4、观察乙酰肝素酶抑制剂JG3对姬细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用。 结果： 1、口腔黏膜恶性黑色素瘤预后差，2年及5年总体生存率为分别为51．1％和30．3％。 患者的主要死亡原因是局部复发及远处转移。．与患者预后有统计学意义的相关因素 为肿瘤大小及MCC分期。目前的各种单一治疗手段之间的差异未显示与患者的预后 有相关的统计学意义。 2、HPA在口腔黏膜恶性黑色素瘤临床样本及细胞系狐细胞中有较高表达，在影响 0删患者的总体生存率的多因素分析中，AJcc分期和HPA表达强度2个因素具有统 计学意义，它们可能是影响患者总体生存率的独立危险因素。 3、运用质粒转染和RNA干扰技术可以有效增加及降低HPA在口腔黏膜恶性黑色素瘤 细胞皿细胞系中的表达，并建立稳定的高表达及低表达的细胞系。HPA表达升高在 体外未明显促进口腔黏膜恶性黑色素瘤的增殖、但可增强其迁移能力、提高体内成 瘤能力。HPA表达降低可抑制恶性黑色素瘤的增殖、减弱其迁移能力、降低体内成瘤 能力。 4、乙酰肝素酶靶向抑制剂JG3使皿细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长减慢。 Ⅱ 上海交通大学博士论文 结论： 1、HPA在口腔黏膜恶性黑色素瘤中有表达，HPA在口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞系(姬 细胞)高表达。HPA的表达与口腔黏膜恶性黑色素瘤的侵袭和转移相关。 2、应用RNA干扰技术降低HPA的表达，可抑制口腔黏膜恶性黑色素瘤的增殖、降低 其迁移能力、降低体内成瘤能力。采用质粒转染技术增加HPA的表达，可增强口腔 黏膜恶性黑色素瘤的增殖、增加其迁移能力、提高体内成瘤能力。 3、乙酰肝素酶靶向抑制剂JG3对艇细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长有明显抑制作用。 关键词：乙酰肝素酶，口腔黏膜恶性黑色素瘤，质粒转染，RNA干扰，侵袭，转移 Ill 上海交通大学博士论文