亚抑菌浓度抗生素对野生黑颈长尾雉源大肠杆菌耐药基因水平传播效率影响.pdfVIP

亚抑菌浓度抗生素对野生黑颈长尾雉源大肠杆菌耐药基因 水平传播效率的影响 研究生：李云飞年级：2013级导师：陆祖军教授 专业：微生物学研究方向：环境微生物 摘要 近年来，随着抗生素使用量的增加，细菌的耐药性逐渐增强、获得耐药性的速度逐渐 加快，甚至出现了能够耐受大多数抗生素的“超级细菌”。因此人们更多地关心抗生素的 杀菌效率，但对亚抑菌浓度抗生素对细菌耐药性传播效率的影响少有关注。 本文通过对野生黑颈长尾雉源大肠杆菌耐药性、携带的可移动遗传元件及几种常用的 抗生素在亚抑菌浓度条件下对耐药基因传播效率的影响进行研究，了解野生状态下大肠杆 菌的耐药性，并对该野生雉类的人工驯养回放保护性措施可能引起的耐药性传播风险及亚 抑菌浓度抗生素对耐药基因水平传播效率的影响的评价提供资料。 采集广西百色市田林县野生黑颈长尾雉自然分布区野生黑颈长尾雉新鲜粪便，并利用 显色培养基分离筛选大肠杆菌；以苹果酸脱氨酶基因(mdh)特异性引物对所分离大肠杆 菌进行鉴定，并对其16SrRNA进行扩增验证；对所分离的大肠杆菌肠杆菌基因问保守重 所获得的不同ERIC指纹型大肠杆菌菌株的耐药性进行检测；经聚合酶链反应(PCR)检 测所获得的ERIC指纹型大肠杆菌菌株所携带的可移动遗传元件；以原位杂交方法确定其 中一株大肠杆菌的四环素耐药基因类型及存在位置；通过在含有不同浓度抗生素的培养基 中混合培养大肠杆菌和产酸克雷伯氏菌的方式检测亚抑菌浓度抗生素对大肠杆菌耐药基 因传播效率的影响。结果如下： (1)本研究利用大肠杆菌显色培养基从5份粪便样品中分离到100株大肠杆菌，mdh 基因检测并经16SrRNA验证，排除其中2株非大肠杆菌。可见该显色培养基筛选大肠杆 菌的准确率可达98％。 标定距离为15时，可被分为4个类群。表明本研究中采集的野生黑颈长尾雉粪便内大肠 杆菌种群结构较复杂。 (3)药敏实验结果显示p内酰胺类及四环素类抗生素对所分离大肠杆菌抑制效果较 差，其中青霉素G对所分离大肠杆菌无抑制作用，头孢曲松耐药株占11．76％，所有菌株 对四环素均不敏感；相反，喹诺酮类、脂肽类及氨基糖苷类抗生素具有很好的抑菌效果， 喹诺酮类抗生素环丙沙星和氧氟沙星的抑菌率分别高达88．24％和76．47％，多粘菌素B的 抑菌也达到82．35％。 生素具有抗性。若不考虑革兰氏阴性菌对青霉素G天然耐受这一因素，则在所有耐药菌株 I 万方数据 中，未出现可以同时耐受3类及以上抗生素的“超级细菌”。 intI，并检出5种大小不同的I类整合子可变区但不含耐药基因盒的片段；未检出rraF、 f孵口、l”f明及妇f．砌遗传标记。表明菌株携带的可移动遗传元件种类虽然较单一，但仍然 具有传播与获得耐药基因的风险。 非F质粒，共培养时此基因可转移至产酸克雷伯氏菌突变株TR-M30．-1。在培养基中共培 养时，传播效率与硫酸卡那霉素和氨苄青霉素的亚抑菌浓度呈正相关(P0．05)，与磺胺二 甲基嘧啶、强力霉素及铜离子浓度无显著性相关；在模拟自然条件中，传播效率与上述药 品浓度间均无显著相关性。 关键词：亚抑菌浓度；抗生素；黑颈长尾雉；大肠杆菌；耐药基因；传播效率 互 万方数据 in of ResistanceGenes TheHorizontalDisseminationDrug Efficiency of Wild humiaeundertheInfluence Escherichiacolifrom Syrmaticus ConcentrationsofAntibiotics