协同信号分子B7-H3对肺炎球菌脑膜炎小鼠趋化因子KC、MIP-2及TLR2蛋白表达影响.pdfVIP

协同信号分子B7-H3 对肺炎球菌脑膜炎小鼠趋化因子KC、MIP-2 及TLR2 蛋白表达的影响 中文摘要 协同信号分子B7-H3 对肺炎球菌脑膜炎小鼠趋化因子 KC 、MIP-2 及TLR2 蛋白表达的影响 中文摘要 实验目的： 细菌性脑膜炎是儿童时期较严重的神经系统感染性疾病，近年来，尽管以抗生素 为主导的治疗手段使细菌性脑膜炎预后已大为改观，但是该病目前仍有较高的死亡率 和致残率，因此进一步研究细菌性脑膜炎的免疫病理机制，寻找新的干预手段意义重 大。细菌性脑膜炎最显著的病理特征之一是由于外周血大量的炎症细胞在趋化因子的 作用下，穿越血脑屏障，向脑内迁移和聚集。因此，炎性趋化因子在介导细菌性脑膜 炎的免疫炎症反应中发挥举足轻重的作用。角蛋白趋化因子（Keratinocyte chemoattractant ，KC ）和巨噬细胞炎症蛋白2 （Macrophage-inflammatory protein 2 ， MIP-2 ）是CXC 类趋化因子中的重要成员，在机体免疫炎症反应中发挥重要的作用。 协同信号分子是介导抗感染免疫应答过程的重要成分，B7 同源性3 （B7 Homology 3 ， B7-H3 ）是B7 家族的新成员，其在抗感染免疫应答中发挥着重要的免疫调控作用。 本研究在我们前期发现细菌性脑膜炎患儿体内可溶性 B7-H3 分子异常高表达的基础 上，通过体内外实验观察B7-H3 对细菌性脑膜炎动物模型中趋化因子KC 、MIP-2 及 TLR2 （Toll-like receptor 2 ）蛋白表达的影响，探讨B7-H3 在细菌性脑膜炎炎症趋化 作用的影响，了解其在细菌性脑膜炎病情进展中的作用，以期为细菌性脑膜炎的免疫 干预提供新的思路和实验依据。 实验方法： 1、体内试验，研究B7-H3 对肺炎链球菌脑膜炎小鼠神经行为学改变、体质量的 变化和脑组织匀浆中趋化因子KC 、MIP-2 mRNA 相对表达量及TLR2 蛋白的表达的 影响。取月龄为 1.5-2 月的健康雄性BALB/C 小鼠48 只，随机分为4 组：生理盐水 对照组（CON 组）、B7-H3 组（B7-H3 组）、肺炎链球菌组（SP 组）、肺炎链球菌 +B7-H3 蛋白组（SP+B7-H3 组）；每组12 只小鼠。腹腔注射诱导麻醉后，通过侧脑 I 中文摘要 协同信号分子B7-H3 对肺炎球菌脑膜炎小鼠趋化因子KC、MIP-2 及TLR2 蛋白表达的影响 室定位注入 10 μl 无菌生理盐水+5 μl 肺炎链球菌混悬液来建立小鼠细菌性脑膜炎模 型；CON 组注射 15 μl 无菌生理盐水，B7-H3 组注入 10 μlB7-H3 蛋白+5 μl 无菌生 理盐水，SP 组注入 10 μl 无菌生理盐水+5 μl 肺炎链球菌混悬液，SP+B7-H3 组注入 10 μlB7-H3 蛋白+5 μl 肺炎链球菌混悬液。分别于侧脑室注射后6h、24h 对各组小鼠 进行：1）神经行为学评分、2 ）记录体质量的变化、3 ）HE 染色方法观察脑组织炎症 状况、4 ）Real-time PCR 方法检测脑组织中趋化因子KC 、MIP-2 mRNA 的相对表达 量、5 ）免疫组织化学方法检测大脑皮层中TLR2 蛋白的表达。 2 、体外实验， 研究 B7-H3 对肺炎链球菌感染条件下小胶质细胞培养上清液中 趋化因子KC 、MIP-2 表达的影响。选用生后 1-3 天的BALB/C 新生小鼠，无菌条件 下取脑组织，经分离、培养、纯化后获得原代小胶质细胞，接种于24 孔培养板中， 5 细胞密度为1×10 /孔。实验分组：对照组（CON 组）、肺炎链球菌感染组（SP 组）、 肺炎链球菌+B7-H3 蛋白组（SP+B7-H3 组）,三组细胞体系中均加入等量的头孢曲松 （浓度为100 μg∙ml-1 ）以抑制细菌的过度繁殖。分别在刺激后5h、24h、48h 收集细 胞培养上清液，用ELISA 方法检测上清液中趋化因子KC 、MIP-2 的浓度变化。 实验结果： 一、体内试验 1、神经行为学评分：各组小鼠侧脑室注射后6h、24h 后进行神经行为学评分， B7-H3 组与 CON 组相比 6