舒郁安神方对老年肝郁失眠大鼠模型学习记忆和脑组织Glu、GABA含量的影响.pdfVIP

舒郁安神方对老年肝郁失眠大鼠模型学习记忆及脑 组织Glu、GABA 含量的影响1 1 1 2 1 吴丽丽 ，王平 ，游秋云 ，章程鹏 1 湖北中医学院老年医学研究所, 武汉（430061 ） 2 湖北中医学院省部共建中药资源与中药复方教育部重点实验室，武汉（430065 ） E-mail: Pwang54@ 摘 要：目的：探讨舒郁安神方对老年肝郁失眠大鼠模型学习记忆及不同脑区Glu 、γ-GABA 含量的影响。 方法：采用D-半乳糖致亚急性衰老，夹尾刺激致肝郁，改良多平台水环境法 致失眠建立老年肝郁失眠大鼠模型。采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力的变化；采用 高效液相法分别测定大鼠额叶皮质及下丘脑部位Glu 、GABA的含量，考察舒郁安神方对其 影响。结果：老年肝郁失眠模型大鼠经舒郁安神方干预后，学习记忆能力明显改善，GABA 含量明显下降，Glu含量则无明显变化。结论：舒郁安神方对学习记忆具有较好的保护作用， 而调节GABA 、Glu两种神经递质的含量比值则可能是其治疗老年肝郁失眠的作用机制之一。 关键词：老年；肝郁；失眠；谷氨酸；γ-氨基丁酸 1. 引言 随着我国人口老龄化进程的加快，老年失眠作为临床常见病及多发病，正日益受到关注。 据统计，失眠在老年患者中发病率较其他年龄段明显增高，超过65 岁的老年人群接近一半 患有失眠[1]，肝郁型失眠则是临床常见的老年失眠证型之一。舒郁安神方是导师王平教授在 对古方理解的基础上，着重从肝郁、痰浊入手，结合长期的临床实践组配而成，用于治疗老 年失眠多梦、神疲乏力、头晕健忘等症疗效显著，体现了从痰郁论治失眠的学术思想。本课 题拟在前期成功建立老年肝郁失眠大鼠模型的基础上，从学习记忆能力及脑内神经递质 （GLU、γ-GABA ）方面探讨舒郁安神方治疗老年肝郁失眠的作用机制。 2. 实验材料 2.1实验药物 舒郁安神方，由柴胡、黄芩、白芍、橘红、茯神、酸枣仁、龙齿、夏枯草、熟地、女贞 子、浮小麦、大枣、炙甘草组成，均购自湖北中医学院专家门诊药房，以上方药加5 倍于药 材的冷水，浸泡20min 后武火煎煮30min，滤出药渣，将两次煎取的药液混匀，浓缩成每毫 升含生药1g 的药液，置冰箱内0 至4 ℃保存备用； D-半乳糖，国药集团化学试剂有限公司生产（批号：），用生理盐水配成浓 度为5%，0~4℃冷藏备用。 舒乐安定片，山西亨瑞达制药有限公司生产（批号：070201 ）；戊巴比妥钠，上海化学 试剂厂生产，批号：800603. 2.2 自制设备 参考文献 [2、3] 的方法，自制睡眠剥夺箱，为长80cm、宽60cm、高30cm 的鼠箱，内 置6 个直径为6.5cm，高为8.0cm 的平台，排成两行，平台间间隔及平台与箱壁间间隔均为 15cm，在平台周边注满水，水面距平台面约1.0cm，大鼠在平台上可自行饮食饮水，并可在 不同平台上自由活动。于平台之上22cm 处放置笼罩，笼罩以平行的不锈钢丝制成，中间为 1本课题得到武汉市科技局晨光计划（No.200750731279 ）基金资助。 - 1 - 凹槽，上面放水和食物。水温和室温保持一致，控制在22-24 ℃左右，每日换水并清理实验 箱。自制的睡眠剥夺对照箱与睡眠剥夺箱相似，但不放置小平台，而是在距其底部8.0cm 处 放置一面细密铁丝网，在网下注满水，水面距网面约1.0cm，大鼠在网上可自行饮食饮水及 自由活动，以形成与睡眠剥夺组相似的环境。 2.3主要试剂与仪器 Glu、GABA 标准品，均购自美国Sigma 公司；邻苯二甲醛（OPA，分析纯) ，购自北京 奥得赛化学有限公司；乙腈(色谱纯) ，德国Merck 公司生产；甲醇为色谱纯；其余试剂均为 国产分析纯，试剂用水为三蒸水。 2K15 型超速低温冷冻离心机；三星笔记本电脑，型号NP-R20 ；Kin