4_氯乙酰乙酸乙酯羰基还原酶产生菌的筛选及产酶条件研究.pdfVIP

　第 35 卷 第 2 期 工 业 微 生 物 　Vol. 35 No. 2 　 　2005 年 6 月 Industrial Microbiology June 2005 4 - 氯乙酰乙酸乙酯羰基还原酶产生菌的筛选及 产酶条件研究 钟 　萍 , 　衡湘斐 , 　孙志浩 (江南大学生物工程学院生物催化研究室 ;工业生物技术教育部重点实验室 ,无锡 ,214036) ( ) 摘 　要 　　从实验室保藏的菌株中 ,筛选到一株立体选择性较高的产 4 - 氯乙酰乙酸乙酯 COBE ( ) 羰基还原酶的菌株 ———出芽短梗霉 Aureobasidium pullulans SW0202 ,菌体产酶条件研究表明 ,最佳 的发酵培养基配方为: 麦芽糖 30. 0 g/ L , 酵母膏 20. 0 g/ L , 蛋白胨 3. 0 g/ L , (NH ) SO 5. 0 g/ L , 4 2 4 KH PO 2. 0 g/ L ,MgSO ·7H O 0. 7 g/ L ,最适发酵温度及初始pH 分别为 : 28 °C 和pH 6. 0 。该菌在此 2 4 4 2 条件下发酵培养 24h ,产菌丝体生物量 16. 78 g 干菌体/ L ,COBE 羰基还原酶酶活力达到1 007 U/ L 。 在 COBE 的转化反应中 ,产物 SCHBE 的浓度达到 10. 12 g/ L ,光学纯度 97 %e. e. 。 关键词 : 4 - 氯乙酰乙酸乙酯 ; 　S4氯3羟基丁酸乙酯 ; 　羰基还原酶 ; 　出芽短梗霉 　　具有特定功能基团的手性醇是合成手性药物的 原酶是 NADPH 依赖型的[5 ] 。羰基还原反应需要 重要中间体。例如 , 手性 4氯3羟基丁酸乙酯 NADPH 再生系统 , 需要添加葡萄糖脱氢酶和辅酶 ( ) CHBE 是一种重要的手性醇 ,可用来合成多种医药 NADPH/ NADP 。采用微生物细胞还原羰基化合物有 ( ) 或农用化学品 ,如 R 4氯3羟基丁酸乙酯可用来 利于实现辅酶的原位再生。微生物产生的氧化还原 β ( 合成 L肉碱及 1 ,4二羟嘧啶型 阻滞剂 1 ,4dihy 酶系中 ,可能有 R 型酶 ,也可能有 S 型酶。R 型和 S β ) ( ) dropyridinetype blocker ,而 S 4氯3羟基丁酸乙 型酶的活力将直接影响反应的立体选择性。 ( ) 酯则是 3羟基3甲基戊二酰辅酶A HMGCoA 还原