吡柔比星对鼻咽癌细胞株CNE2生长和XIAP表达的影响.pdfVIP

目录 中文摘要I ABSTRACTIII 符号说明VI 前言1 1 材料3 1.1 主要试剂3 1.2 主要试剂的配制 4 1.3 实验仪器5 2 方法6 2.1 细胞培养与冻存6 2.2 MTT 实验7 2.3 克隆形成实验7 2.4 RT-PCR 实验8 2.5 免疫细胞化学检测9 2.6 统计学处理11 3 结果11 3.1 MTT 测定结果 11 3.2 克隆数的比较12 3.3 免疫细胞化学检测结果 13 3.4 RT-PCR 结果14 4．讨论16 5．结论18 参考文献19 附 录22 吡柔比星对鼻咽癌细胞株CNE2 生长 和XIAP 表达的影响 中文摘要 目的X 连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP) 在许多肿瘤中均高表达，而它在正常分化成熟组织中不表达或低表达，与 肿瘤的发生发展有十分密切的关系。探讨化疗药物吡柔比星对鼻咽癌细胞 株CNE2 增殖、克隆形成和凋亡抑制基因XIAP mRNA 和蛋白表达的影响，为 鼻咽癌治疗与研究提供新的靶点。 方法 体外培养鼻咽癌细胞株CNE2，于37℃，5%CO 的培养箱中培养， 2 细胞对数生长期时加入不同浓度的吡柔比星处理后，用 MTT 法检测细胞增 殖情况；采用克隆形成实验观察细胞克隆形成；用RT-PCR 方法检测鼻咽癌 细胞株 XIAP mRNA 的表达情况；制作细胞爬片做免疫细胞化学了解细胞株 XIAP 蛋白的表达。应用 SPSS 11.0 软件进行统计学处理，采用方差分析 (ANOVA),P 0.05 为差异具有统计学意义。 结果 MTT 结果显示加入临床用药浓度1 倍、临床用药浓度的1/10 倍、 临床用药浓度的1/100 倍作用24h 对细胞的抑制率分别为74±0.3%、39± 0.5%、13±0.2%；作用48h 对细胞的抑制率分别为83±0.4%、77±1.1%、 19±0.5%。因此，吡柔比星对细胞的抑制作用具有明显的时效和量效关系。 克隆形成实验结果表明 1 倍临床用药量细胞克隆数（90±5）、1/10 倍临床 用药量细胞克隆数（264±8）与对照组细胞克隆数（403±10）相比有显著 性意义（P ﹤0.05）。随着药物浓度的增加而克隆数减少，克隆变小。RT-PCR 法检测显示XIAP mRNA 表达下调，对照组、加临床用药量1/10 组及加临床 I 用药量1 倍组XIAP 与β-actin 的比值分别为0.97±0.015、0.53±0.020、 0.18±0.011。经统计学处理，三组之间P ﹤0.05 均有统计学意义。免疫细 胞化学结果提示XIAP 蛋白在胞浆和胞核中均有表达，加药组与对照组相比 较，XIAP 蛋白表达明显下调且药物浓度越大下调作用越明显。 结论 1 吡柔比星可抑制体外培养的鼻咽癌细胞株CNE2的增殖，此细胞株对 吡柔比星具有很好的敏感性。 2 吡柔比星可下调鼻咽癌细胞株CNE2中XIAP mRNA和蛋白的表达。 3 吡柔比星对鼻咽癌细胞株CNE2的抑制作用与XIAP表达下调有关。 4 吡柔比星对咽癌细胞的作用值得进一步研究，本研究将会为鼻咽癌 的治疗与研究开辟新的思路。 关键词 鼻咽癌；XIAP；吡柔比星；MTT；免疫细胞化学 II THE EFFECTS OF THP TO THE GROW OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMACELL LINE CNE2 AND THE EXPRESSION OF XIAP ABSTRACT Objective XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis protein) have