含稀土配合物的荧光编码聚苯乙烯微球的制备与表征.pdfVIP

中文摘要 悬浮阵列技术是近年来发展起来的高通量检测技术。该技术通过流式细胞仪 对结合靶分子的荧光编码微球进行高速测定，可同时检测多达 100 种不同靶分 子，具有快速和高通量的优点，在生命科学领域有广泛的应用前景。其中，荧光 编码微球的制备与功能化，是实施该技术的关键。荧光编码微球可通过对单分散 聚合物微球进行染色来制备。目前所用的染料大多为有机染料和量子点，但它们 都存在荧光寿命短、易受背景荧光及杂散光的干扰等缺点。相比之下，稀土材料 荧光寿命长、发射光谱窄、Stokes 位移大，有利于消除背景荧光和杂散光的干 扰，提高检测的灵敏度和分辨率。目前，稀土聚合物微球可通过包埋法和键合法 来制备，但这两种方法均不能保证荧光微球良好单分散性，也不能对微球的荧光 强度进行精确控制，不适用于荧光编码微球的制备。 本文的目标是发展含多色稀土配合物，荧光强度精确可控的荧光编码微球制 备方法，为悬浮阵列技术提供性能优于有机染料微球的下一代编码微球。内容包 括：（1）单分散聚合物微球的制备、表征与官能团化；（2 ）铕或铽配合物的制备 与表征；（3 ）稀土荧光微球的制备与表征；（4 ）稀土荧光编码微球的制备与表征。 首先，用乳液聚合、无皂乳液聚合和分散聚合三种方法制备出了粒径在 50 nm-5 μm 的单分散聚苯乙烯微球 （PS ），并对其表面进行了羧基化和氨基化修饰， 便于其与生物分子偶联。然后，选择单色性和稳定性好的铕-二苯甲酰甲烷-邻菲 罗啉 （Eu(DBM) phen ）为荧光染料，采用溶胀法和包覆法分别制备出了微米级 3 和亚微米级含铕配合物红色荧光微球（Eu@PS ），并考察了各种方法中影响微球 形貌和荧光强度的主要因素，优化了反应条件。通过环境扫描电子显微镜 （ESEM ）或透射电子显微镜（TEM ）、荧光显微镜和荧光分光光度计对制备得 到的微球进行表征，所制备的荧光微球具有良好的单分散性，微球的荧光强度可 通过调节合成反应中 Eu(DBM) phen 的用量加以控制。接着，以胰蛋白酶为模型 3 蛋白质，用 Eu@PS-NH2 微球对其进行固定化，研究了荧光微球与蛋白质的相互 作用，结果显示，反应过程中微球的荧光基本稳定，可以应用于生物检测中。最 后，引入发绿色荧光的配合物铽- 乙酰丙酮-邻菲罗啉（Tb(acac) phen ），采用一步 3 溶胀法和两步法，成功制备出了 6 种 Eu/Tb@PS 荧光编码微球。 综上，采用溶胀法和包覆法，成功制备了颗粒分布均匀，荧光强度可控的微 米和亚微米级 Eu@PS 红色荧光微球。在此基础上，通过引入绿色荧光的铽配合 物制备了 6 种微米级 Eu/Tb@PS 荧光编码微球。所制备的稀土荧光微球荧光性质 稳定，发射光谱窄，荧光强度精确可控，性能优于商品有机染料荧光编码微球。 关键词：悬浮阵列技术，荧光编码微球，稀土配合物，聚苯乙烯，溶胀法，包 覆法 ABSTRACT Suspension array technology has emerged as a powerful tool for high-throughput detection over the past decade. This technology is based on the use of flow cytometry to detect target bound fluorescence-encoded microspheres at high speed, capable of detecting up to 100 different targeting species in a single run. Because of the speed and throughput, the suspension array technology is believed to play an increasingly important role in fields of life science. The key to success in suspen