超顺磁氧化铁纳米颗粒标记人端粒酶反转录酶基因修饰神经干细胞及体外MRI成像介绍.doc

超顺磁氧化铁纳米颗粒标记人端粒酶反转录酶基因修饰 神经干细胞及体外MRI成像 窦文广，岳军艳，胡 莹，吴清武，陈 杰(新乡医学院第一附属医院放射科，河南省新乡市 453100) 引用本文：窦文广，岳军艳，胡莹，吴清武，陈杰. 超顺磁氧化铁纳米颗粒标记人端粒酶反转录酶基因修饰神经干细胞及体外MRI成像[J].中国组织工程研究，2016，20(45):6821-6826. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.020 ORCID: 0000-0003-0465-0900(窦文广) 文章快速阅读： 文题释义： 人端粒酶：是一种核糖核蛋白复合物，由人端粒酶反转录酶、人端粒酶RNA组分以及人端粒酶相关蛋白组成。端粒酶利用其自身人端粒酶RNA组分所携带的RNA为模板，在人端粒酶反转录酶的反转录催化下，将端粒重复序列合成到染色体末端，延长或稳定了随着细胞分裂而进行性缩短的端粒，在细胞永生化及恶性肿瘤的发生和发展中起到了重要的作用。 超顺磁氧化铁纳米颗粒：是一种组织特异性MRI对比剂，多以葡聚糖等包裹氧化铁颗粒而得到，直径一般在纳米级，理化性质稳定，超顺磁氧化铁纳米颗粒分布于组织后，扰乱了内部磁场，引起质子自旋快速失相位，从而缩短了组织的T2值和T1值(对T2更明显)，在MRI上表现低信号影。 摘要 背景：细胞标记与体外MRI成像联合，可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性。 目的：探讨超顺磁氧化铁纳米颗粒(SPIO)标记对人端粒酶反转录酶(hTERT)基因修饰神经干细胞生物学特性的影响及标记后MR成像效果。 方法：体外培养大鼠骨髓来源的神经干细胞，将其分为正常神经干细胞组、SPIO标记神经干细胞组、SPIO标记空载病毒组及SPIO标记hTERT转染组。采用电穿孔法将pcDNA3-hTERT 重组质粒转染至神经干细胞，并进行SPIO标记，当神经干细胞标记成功后即行4.7T MR扫描，流式细胞仪、MTT法检测细胞周期、细胞增殖能力，RT-PCR和Western blot检测hTERT基因和蛋白的表达。 结果与结论：①普鲁士蓝染色显示SPIO对神经干细胞的标记率为97%；②MRI成像显示，与正常神经干细胞组相比，SPIO标记神经干细胞组的T2及T2*弛豫时间均显著下降，相应的弛豫率则显著升高(P 0.01)；③与正常神经干细胞比较，SPIO标记的3组神经干细胞增殖能力相比明显增强，处于G0-G1及S期的比例明显增多；④与SPIO标记神经干细胞组、SPIO标记空载病毒组比较，SPIO标记hTERT转染组hTERT mRNA及蛋白的表达均明显增强；⑤结果表明，在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞，经hTERT基因修饰后能够稳定表达hTERT基因，细胞增殖能力显著增强，4.7T MR仪能够对标记后的细胞有效进行体外成像。 关键词： 干细胞；培养；神经干细胞；氧化铁标记；超顺磁性氧化铁粒子；hTERT；基因修饰；磁共振成像 主题词： 神经干细胞；端粒，末端转移酶；生物，基因修饰；组织工程 缩略语： 超顺磁氧化铁纳米颗粒：super paramagnetic iron oxide，SPIO；人端粒酶反转录酶：human telomerase reverse transcriptase，hTERT Neural stem cells modified by human telomerase reverse transcriptase gene: superparamagnetic iron oxide labeling and in vitro MRI imaging Dou Wen-guang, Yue Jun-yan, Hu Ying, Wu Qing-wu, Chen Jie (Department of Radiology, First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Xinxiang 453100, Henan Province, China) Abstract BACKGROUND: Cell labeling in combination with in vitro MRI imaging can be used to noninvasively label transplanted neural stem cells (NSCs), thereby exhibiting the existing site, existing way and some biological properties of the cells. OBJECTIVE: To investigate