结直肠癌患者外周血中抗survivin抗体与survivin mRNA表达及临床意义.pdfVIP

目 录 结直肠癌患者外周血中抗survivin 抗体与survivin mRNA 表达及临床 意义…………………………………………………………..…………1 中文摘要……………………………………………………..………….1 ABSTRACT…………………………………………………..…………5 英汉缩略词对照表…………………………………………..…………11 前言………………………………………………………..……………13 1 材料与方法 …………………………………………...…………… 17 1.1 主要实验试剂 …………………………………………………… 17 1.2 主要实验仪器…………………………………………..………… 18 1.3 实验方法……………………………………………………………19 1.4 统计方法……………………………………………...……………29 2 结果……………………………………………………..……………30 2.1 抗survivin 抗体及survivin mRNA 在CR 及正常人中的表达… 30 2.2 抗survivin 抗体及Survivin mRNA 与CRC 临床病理特征……..31 2.3 手术对抗survivin 抗体及survivinmRNA 水平的影响………..… 31 2.4 抗survivin 抗体及survivin mRNA 与化疗疗效的关系……………34 2.5 抗survivin 抗体与survivin mRNA 的相关性分析……………….36 3 讨论 …………………………………………………………………36 4 结论 …………………………………………………………………42 参考文献……………………………………………………….…….…43 综述………………………………………………………………….… 52 攻读学位期间发表的学术论文目录……………………………….… 67 致谢……………………………………………………………….…… 68 结直肠癌患者外周血中 抗survivin 抗体与survivin mRNA 表达及临床意义 中文摘要 目的: 结直肠癌（CRC ）是最常见的消化道肿瘤之一，由于早期 诊断率低，术后易复发或转移，其仍是一种具有高侵袭性、高病死率 的恶性肿瘤。结直肠癌的早期诊断及复发或转移的监测是目前亟待解 决的问题，寻找方便有效的标志物显得尤为重要。本研究的目的就是 探讨结直肠癌患者外周血中抗survivin 抗体及survivin mRNA 的表达 情况及其临床意义，为结直肠癌的诊治提供更多的生物学标志物。 方法: 选择CRC 患者116 例，依据所接受治疗手段，分为根治手 术组、姑息手术组、姑息化疗组。对照组为30 例健康体检者。根治 手术组和姑息手术组分别于手术前1 天、术后第4 周末清晨空腹采集 外周血5ml，其中根治手术组每3 个月随访一次，抽外周血5ml；姑 息化疗组于化疗前及化疗2 周期后采集外周血5ml；对照组清晨空腹 采集外周血5ml 。所采集血液标本中，其中2ml 使用无抗凝剂的真空 管采集，以3000r/min，离心 10min，取上清液，冻存于-20 ℃冰箱， 用于检测抗survivin 抗体；剩余3ml 使用含有乙二胺四乙酸抗凝剂的 真空管采集，采集后室温静置半小时，然后提取总 RNA，用于检测 survivin mRNA 。应用双抗原夹心酶联免疫吸附法测定血清中抗 survivin 抗体的水平。向预先包被人存活素抗体的酶标孔中加入标准 1 品、待测样本和辣根过氧化物酶标记的存活素抗体，经过温育和洗涤， 去除未结合的组分，然后依次加入底物A 、B ，产生蓝色，并在酸的 作用下转化成为最终的黄色。颜色的深浅与样品中抗survivin 抗体的 浓度呈正相关。通过测定标准品得到标准曲线方程，依据标准方程计 算抗survivin 抗体浓度。应用半定量RT-PCR 法测定外周血中survivin mRNA 相对表达水平。首先提取外周血中总RNA ，检测其纯度和完 整性后，进行反转录。反应体系包括5 ×Buffer 2µl ，RT Enzyme Mix Ι0.5µl，Oligo dT Primer(50M) 0.5µl，Ra