莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2凋亡及NF-κB与Bcl-2表达的影响.pdfVIP

综述……………………………………………………………………………37 攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………45 致谢……………………………………………………………………………45 II 莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2 凋亡及NF- κB 与 Bcl-2 表达的影响 中 文 摘 要 目的：研究体外不同浓度莪术醇（curcumol）诱导鼻咽癌细胞 CNE-2 凋亡及其对核因子- κB （Nuclearfactor kappa B，NF- κB）与凋亡抑制蛋 白 Bcl-2 表达的影响。探讨莪术醇对鼻咽癌细胞 CNE-2 凋亡的诱导作用， 初步阐明莪术醇的诱导细胞凋亡的机制，为莪术醇抗肿瘤的临床应用提供 实验依据。方法：将莪术醇溶于无水乙醇，初始浓度为 10mg/mL。按比例浓 度配制为 12.5、25、50、100 μg/mL 莪术醇培养基，并以含 1%无水乙醇培 养基为阴性对照组。采用 MTT 法检测 12.5、25、50、100 μg/mL 四种不同 浓度莪术醇作用 CNE-2 细胞 24、 48、 72、 96、120 h 后细胞增殖抑制作 用;采用 hochest33342 荧光染色法观察莪术醇处理 CNE-2 细胞 48 h 后细胞 凋亡的形态学变化;采用流式细胞术检测莪术醇处理 CNE-2 细胞 48 h 后的 凋亡率；采用 Western Blot 检测莪术醇处理 CNE-2 细胞 48h 后 NF- κB和 凋亡抑制蛋白 Bcl-2 的表达。结果：12.5-100 μg/mL 莪术醇可以抑制细胞 增殖，莪术醇对细胞增殖的抑制作用随莪术醇浓度增加和作用时间延长 (12.5μg/mL 以外)而逐渐增强，药物作用 48、72、96、120 h 后，加药组 的抑制率与对照组比较，有显著性差异 （P0.05)，而 12.5 μg/mL 药物处 理组与对照组相比差异无显著性（P0.05）； Hoechst33342 染色荧光显微 镜下可见经 100 μg/mL 莪术醇作用 48h 后，普通光学显微镜下形态学表现 为细胞体积缩小、细胞脱落、染色质聚集、核固缩、核碎裂等；荧光显微 I 镜下可见凋亡细胞的细胞核呈现致密浓染的强蓝色荧光，并可见凋亡小体 而对照组中正常细胞的细胞核则呈现弥散均匀的淡蓝色荧光；流式细胞仪 检测发现：CNE-2 细胞经不同浓度的莪术醇 (12.5，25，50，100 μg/mL)及 阴性对照组作用48 h 后，12.5 μg/mL 与 25 μg/mL 莪术醇作用 CNE-2 后细 胞凋亡率与对照组的比较，差异无统计学意义（P＞0.05），浓度为50ug/mL 以上的莪术醇作用 CNE-2 后细胞后细胞凋亡率与与对照组相比有统计学意 义（P＜0.01），并且随莪术醇浓度的增加，活细胞数的比例不断减少，凋 亡逐渐增加，呈明显的浓度依赖性 ；Western Blot 结果显示 : 12.5-100 μg/mL 莪术醇可以降低 CNE-2 细胞 NF- κB及 Bcl-2 蛋白的表达， 莪术醇处理 CNE-2 细胞 48h 后，NF- κB及 Bcl- 2 蛋白表达的相对含量随莪 术醇浓度增加和作用时间延长而逐渐降低，加药组与对照组 NF- κB及 Bcl- 2 蛋白表达的相对含量比较，差异有统计学意义,同时两者之间有相关性 （r=0.975,P＜0.01）。结论： 莪术醇作用 CNE-2 细胞 24、48、72、96、120 h 后能明显抑制CNE-2 细胞细胞生长，抑制作用呈时间-剂量依赖性； 莪术 醇作用CNE-2细胞48 h 后，在体外可诱导CNE-2细胞凋亡；莪术醇作用CNE-2 细胞 48 h 后，可抑制 NF- κB 的表达，这可能是莪术醇抑制肿瘤生长诱导 细胞凋亡的机制之一；莪术醇作用 CNE-2 细胞 48 h 后，可下调Bcl-2 蛋白 的表达，从而促进其凋亡，并与NF- κB的表达有相关性。 关键词： 莪术醇；鼻咽癌；增殖；凋亡；NF-κB ；Bcl-2 II Effect of Curcumol on Nasopharyngeal Carcinoma Cell Line CNE-2