猪流感病毒HA基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立.PDFVIP

动物医学进展 ,2007 ,28 (7) :3539 Pro gre ss in Vet erinary Medicine 猪流感病毒 HA 基因的原核表达及其 EL ISA 检测方法的建立 李 　春 ,宋云峰 ,金梅林 ,陈焕春 (华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室 ,湖北武汉 430070) 　　摘 　要 :根据 H 1N 1 亚型猪流感病毒血凝素基因序列设计并合成特异性引物 ,从本室保存的 H 1N 1 亚 型猪流感病毒中扩增信号肽和跨膜区缺失的血凝素基因 ,并将其克隆到原核表达载体 p E T28a 中 ,在大肠 埃希菌中诱导表达 。对表达蛋白进行 SD SPA GE 和 We st er n blot 的结果表明 , HA 基因在大肠埃希菌中获 得表达 ,产物具有免疫学活性 ,表达蛋白分子质量约为 55 ku 。表达产物经过纯化作为包被抗原建立了检测 H 1 亚型猪流感抗体的间接 EL ISA 方法 。该方法具有较高的特异性和敏感性 ,重复性 良好 。应用该方法对 2006 年 2 584 份临床猪血清进行检测 ,结果显示多个地区检测猪流感抗体出现阳性 ,平均为 20 . 5 % 。在 6 月 、7 月和 12 月分别出现抗体水平高峰 ,分别高达 25 . 4 % 、25 . 0 %和 35 . 5 % 。 　　关键词 :猪流感病毒 ; H 1N 1 亚型 ;血凝素基因; 间接 EL ISA ( ) 中图分类号 :S852 . 659 . 5 ; S858 . 28 文献标识码 :A 文章编号 2007 ( ) ( 　　猪流感 SI 是由猪流感病毒 Swine influenza 的存在和流行趋势 ,分析 SIV 的流行规律 ,本研究利 vir u s , SIV ) 引起的一种以咳嗽、呼吸困难 、衰竭 、迅 用 H 1 亚型 SIV HA 基因的表达产物建立了间接 速康复或死亡为特征的急性 、高度接触性传染病 。 EL ISA 检测方法 ,并对临床猪血清样品进行了抗体 猪只不分年龄 、性别和品种均能感染 ,发病率高而病 水平的检测 。 死率低 ,是规模化养猪场存在且必须根除的群发性 1 　材料与方法 疾病之一 。李海燕等指出猪流感突出的流行特点是 1. 1 　材料 常常以亚临床形式存在 ,并常激发其他呼吸道病原 1. 1. 1 　病毒和菌种 　SIV H 1N 1 亚型由华中农业 继发或混合感染 ,使猪群死亡率增加 ,难以控制 。 大学农业微生物国家重点实验室分离保存 。E. col i 猪流感的发生已有近百年的历史 ,世界各地均 α ( ) D H5 , E. col i BL 2 1 D E 由华中农业大学农业微生 有该病的发生的相关报道 。目前的研究发现 ,猪群 物国家重点实验室保存和提供 。 中广泛流行的主要有猪 H 1N 1 、类禽 H 1N 1 和类人 1. 1. 2 　质粒及相关试剂 　p MD 18T 载体 ,A MV 反 H3N 2 亚型毒株[ 12 ] 。猪流感在公共卫生学上具有 转录酶 ,L A Taq 聚合酶及相关限制性内切酶购 自宝 重要意义 ,历史上每次人流感的大流行都与猪流感 ( ) 生物