第3章高效液相色谱分析.pptVIP

第三章 高效液相色谱分析 高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法 一、HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形,均匀装柱） 高压输送流动相 柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短 可以在线检测 二、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、 离子型及高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 相对分子质量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 提高柱内填料装填的均匀性,减小粒度 三、高效液相色谱仪流程图 四、HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一广” * * 一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别 三、高效液相色谱仪流程图 四、特点及应用 1．贮液器（滤去颗粒状物质） 2．高压泵（15000~35000KPa)流量稳定 及梯度洗提装置 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感 高效液相色谱仪的色谱柱 4.6mm或3.9mm 球形填料 不规则形填料 5~10μm 空柱管: 200-300元 国产填料 国产装填 = 800-1000 元 进口填料 国产装填 = 1200-1500 元 原装 进口柱 = 2400-3000 元 HPLC 柱 = 空柱管 + 填料(分离介质) 价格? 高效液相色谱仪的生产厂家 Waters Agillent Shimadz Perkin Elmer Varian 大连依利特公司 北京东西电子研究所 高效液相色谱仪LC-2010HT岛津（香港）有限公司 新一代液相色谱∶Alliance Alliance 产品名称：液相色谱仪器 大连依利特 返回 高柱效(n=3万片/米), 柱效高（远高于一般LC） 高灵敏度(紫外检测器最小检出量达纳克级) 高压(150*105~350*105Pa) 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） HPLC应用 医药方面：生物组织 、血样、尿样分析，药剂组 分测定，药物生产控 制，药代研究。 生化方面：主要用于氨基酸、蛋白质、酶、糠尿。 食品方面：果汁，饮料，酒类等中的添加剂。 环境方面：饮用水，废水中质量标准的控制。 大气、土壤污染研究 正常对照组Fig 2 (control group) 诱导后3天组(Hydrocephalus ofthe3day) 诱导后8天组 (Hydrocephalus of the 8day) 诱导后4月组(Hydrocephalus of the 4 month) 狗脑积水不同时期脑组织中肌酸、磷酸肌酸及磷酸腺苷酸的含量变化 Cr Cr Cr Crp Cr Crp Crp AMP AMP AMP AMP ADP ADP Crp ADP ATP ATP ATP ATP ADP HPLC法分析心脏衰竭