磁化PEG-PCL纳米胶束研究-中山大学化学学院.DOC

磁化PEG-PCL纳米胶束研究 建立集癌细胞双重靶向性和超敏磁共振成像(MRI)双功能的药物运输系统，对于恶性肿瘤的早期检测与靶向化疗有重大意义。本文对磁化聚乙二醇-聚己内酯嵌段共聚物(PEG-PCL)胶束进行了初步研究：合成了不同纳米粒径的单分散性四氧化三铁(Fe3O4)颗粒氨基聚乙二醇-聚己内酯(NH2-PEG-PCL)，制备了载有超顺磁性铁氧化物(SPIO)的PEG-PCL胶束，并对其温度稳定性和磁性进行了初步研究。实验证明，制备的SPIO具有均匀的纳米尺寸和超顺磁性，符合医用MRI的基本要求；磁化PEG-PCL纳米胶束具温度耐受性，粒径适中，具有磁性，不易聚集，有望用作磁性药物载体，并预测可作为MRI探针。 1 前言 癌症，也称恶性肿瘤，严重威胁着人们的生命健康，据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年新发病例约1000万，死亡约700万。WHO认为21世纪癌症是人类的“第一杀手”。[1] 抗癌药化疗是手术外最重要的癌症治疗手段，但是由于常规的用药方式对非癌组织损伤很大，其毒副作用往往使肿瘤治疗中断或失败。为提高药物在病灶处的有效浓度和有效停留时间，同时减少非癌组织的毒副作用，人们正致力开发新的药物治疗方式——靶向治疗。其中，由于两亲嵌段共聚物胶束具有适中的纳米粒径(10~200nm)，不易被肾脏排泄清除和网状内皮系统吸收以及吞噬细胞的识别，具有长的体内循环时间和高的稳定性，能对其进行表面修饰实现主动靶向给药，因而，它作为具靶向传输的药物载体而被广泛研究。[2、3]近年来，Gao等对载有超顺磁性铁氧化物(SPIO)的聚合物胶束进行了系列研究，发现其在癌细胞双重靶向运输和超敏磁共振成像(MRI)方面有很好的应用前景，对于恶性肿瘤的早期检测与靶向化疗有重大意义。[4、5] 聚乙二醇(PEG)有优异的亲水性，无毒，无抗原性和免疫原性，最终可通过肾排出。聚ε-己内酯(PCL)具有优良的药物透过性、优异的生物可降解性和生物相容性。PEG和PCL已被美国FDA组织批准在人体内使用。PEG-PCL嵌段共聚物可作为药物运输系统的优良骨架材料。[6、7] 将PEG引入PCL中，通过改变两者的相对含量和共聚物的分子量，可在一定范围内调控材料的亲/疏水性和降解速率，进一步提高对疏水性抗癌药物和SPIO的负载以及控制药物的释放行为。 为建立集癌细胞磁靶向性和磁共振成像双功能的药物运输系统，本文对磁化PEG-PCL纳米胶束进行了初步研究：使用Sun等人发明的方法[8、9]合成了不同纳米粒径的单分散性四氧化三铁(Fe3O4)颗粒；通过阴离子开环聚合合成预定分子量的烯丙基聚乙二醇-聚己内酯(Ally-PEG-PCL)，再通过自由基加成反应合成具端基活性的NH2-PEG-PCL [10]最后，制备了载有SPIO的PEG-PCL胶束，并对其温度稳定性和磁性进行了初步研究。其中，NH2-PEG-PCL的合成还为下一步接上靶向分子作好准备，为建立癌细胞双重靶向性药物运输系统打下基础。 2 实验 2.1 试剂与前处理 苄醚(≥98％，Fluka)；油胺(≥70％，Fluka)；油酸(A.R.，沈阳市试剂三厂)；1,2-十六二醇(≥90％，ALDRICH)；乙酰丙酮铁(99+%，ACROS)；正己烷、沸程60～90℃的石油醚、无水乙醚(A.R.，天津市富宇精细化工有限公司)；无水乙醇、THF、二氯甲烷(A.R.，广州化学试剂厂)；萘(A.R.，国药集团化学试剂有限公司)；钾(A.R.，天津市大茂化学试剂厂)；18-Crown-6醚、半胱胺盐酸盐 (99％，南京德宝生化器材有限公司)；丙烯醇(C.P.，中国医药集团上海化学试剂有限公司)；环氧乙烷(99％，佛山市科的气体化工有限公司)；己内酯(≥99％，Fluka)；过硫酸钾(99.5％，天津市福晨化学试剂厂)阴离子聚合溶剂THF先用CaH2 预干燥，再用钠钾合金（VNa:VK=3:1）为吸水剂，二苯甲酮为指示剂，回流干燥备用；丙烯醇用CaH2预干燥，直接蒸馏备用；己内酯用CaH2预干燥，取清液直接使用；GPC分析用溶剂THF，用五氧化二磷蒸馏除水，使用有机滤膜（孔径为45微米，直径为50毫米）过滤，超声赶走气泡。 2.不同纳米粒径的SPIO的合成与表征 在无水无氧、氮气保护下，向反应容器快速加入Fe(acac)3(2mmol)、1,2-十六二醇(10mmol)、油酸(6mmol)、油胺 (6mmol)和20mL苄醚，磁力搅拌均匀，在 200℃下加热2h，再回流1h，然后移离热源，冷却至室温。产物用无水乙醇沉淀，10kr/min离心分离5min。将沉淀物溶于混有约0.05mL的油酸和油胺的正己烷中，6kr/min离心分离10min。将上层溶液用无水乙醇进行沉淀，6kr/min离心分离10min，将沉淀物分