真菌酵母细胞线粒体形态活性荧光染色试剂盒产品说明书（.PDFVIP

真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集 在线粒体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种实验用真菌/酵母菌株线粒体 的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳 定，滞留持久。 技术背景 真菌/酵母细胞是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的 特点。作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方 面认识最早，最先作为外源基因表达的细胞宿主。线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞 内各种物质代谢所需要的能量。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针 MitoTracker RED 硫醇 Thiol ，是一种含有 （ ）氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地聚集 在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色，在 580nm 波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线 粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。 产品内容 清理液（Reagent A ） 毫升 固着液（Reagent B ） 毫升 预备液（Reagent C ） 毫升 染色液（Reagent D ） 微升 产品说明书 1 份 保存方式 保存 染色液（Reagent D ）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6 月 用户自备 1.5 毫升离心管：用于真菌/酵母染色的容器 载玻片：用于染色观察 微型台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞 培养箱：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析 1 实验步骤 实验开始前，将－20 ℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移 出xx 微升预备液（Reagent C ）和 xx 微升染色液（Reagent D ）到新的 1.5 毫升离 心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。 一、 活体染色 7 1． 准备好 1 毫升新鲜的酵母菌液（OD600 ＝1 至 2 ；1 X 10 细胞/毫升） 2 ． 移入到 1.5 毫升离心管 3 ． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g （或3000RPM，例如 eppendorf 5415 ） 4 ． 小心抽掉上清液 5 ． 加入 xx 毫升预冷的 清理液（Reagent A ），混匀 6 ． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g （或3000RPM，例如 eppendorf 5415 ） 7 ． 小心抽掉上清液 8． 重复实验步骤 5 至 7 一次 9 ． 加入 xx 升预冷的 清理液（Reagent A ），混匀 10．加入xx 微升含有 预备液（Reagent C ）和染色液（Reagent D ）的染 色工作液，充分混匀（注意：参见注意事项 7） 11．放进20 ℃培养箱里孵育 20 分钟 12．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g （或3000RPM，例如 eppendorf 5415 ） 13．小心抽掉上清液 14．加入xx 毫升预冷的清理液（Reagent A ），混匀 15．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g （或3000RPM，例如 eppendorf 5415 ） 16．小心抽掉上清液 17．加入xx 微升预冷的清理液（Reagent A ），混匀 18．移出5