LC培训1(201409).pptxVIP

液相色谱原理与应用;色谱法分类（按流动相种类）;讲课主要内容;样品：植物的石油醚提取液 碳酸钙：固定相 石油醚：流动相;色谱法的发展历史;色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作;HPLC按用途分类;按仪器构成或关键部件大小分类;HPLC按分离机理分类;样品带的移动方式;;前沿法：;洗脱法 前沿法 置换法;2.HPLC仪器与功能部件;高压输液泵;几种高压输液泵的性能比较; 由于分析物组成复杂，以某一恒定组成的流动相可能使部分待测物得到好的分离，但同时又使其它待测物的分离不令人满意！实际工作中采用程序升温（GC）和梯度洗脱（LC）来解决这个问题。;HPLC梯度方式;低压梯度（内梯度）;在线真空脱气装置原理;;HPLC柱：;HPLC填料的结构;载体微球的制备;载体表面修饰;整体柱：色谱固定相新技术;整体柱的发展简史;聚合物整体柱与硅胶整体柱;聚合物基质整体毛细管色谱柱的制备;聚合物组成： 单体：甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA) 交联剂：乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA) 致孔剂：正丙醇，丁二醇，水 引发剂：偶氮二异丁腈(AIBN);第三步：固定相表面改性;强阳离子交换整体短柱快速分离蛋白质 ;弱阳离子交换毛细管整体柱的制备;C18键合硅胶基质毛细管整体柱的应用;HPLC检测技术;3.HPLC主要分离模式;3.1 (液-固)吸附色谱法Liquid-solid adsorption chromatography, LSC ;吸附色谱固定相;吸附剂的选择; 硅胶的类型; 硅胶表面的硅醇基状态;流动相及其选择;吸附色谱的应用;3.2 分配色谱法;正相HPLC：;反相HPLC：;时间，min;以多孔凝胶为固定相，利用凝胶孔的空间尺寸效应，使不同大小的高分子达到分离的HPLC方法。;凝胶色谱分离机理;凝胶色谱法的类型;凝胶色谱分配系数Kp;保留体积与渗透系数的关系 ;凝胶色谱固定相：;检测器与色谱图;凝胶色谱的主要用途;分子量的测定;邻苯二甲酸二烷基酯的分析;高分子溶液的浓缩;凝胶色谱样品净化技术;食品中增塑剂分析样品GPC净化;肉制品中苯并芘HPLC测定样品的GPC净化;GPC样品净化典型条件;3.4 亲和色谱 (affinity chromatography);亲和色谱固定相;基团亲和配基（通用型配基）：;配体;3.5 疏水（相互）作用色谱hydrophobic interaction chromatography, HIC;HIC固定相???面为弱疏水性基团,其疏水性比反相HPLC要低几十到几百倍。而流动相为高离子强度盐溶液。生物大分子（蛋白质）在这样的固定相和流动相中进行分配。 蛋白质分子上的疏水性基团与固定相表面的疏水基团发生疏水相互作用而被保留。 在高盐缓冲液中, “盐析”作用更有助于生物大分子与固定相表面疏水基团发生非极性相互作用。 通过梯度洗脱技术降低洗脱液盐浓度，疏水性有差异的物质得以分离，疏水性越小，流出越快。;疏水作用色谱与反相色谱的比较;蛋白质在疏水柱和反相柱上的分离比较;3.6 手性色谱法（chiral chromatography）;沙利度胺：俗名“反应停”，曾用作孕妇止呕药。;对映异构体的常用拆分方法;用于对映体拆分的色谱方法;手性色谱法;将手性异构体混合物与手性试剂反应，生成性质差异明显的非对映体后色谱分离。例如：氰醇衍生成Mosher酯后，可用GC或HPLC进行分离。;手性流动相添加剂法;手性固定相类型;Pirkle手性固定相 ;;S-3;纤维素和多糖衍生物手性固定相;纤维素手性柱拆分外消旋1-苯基乙醇类化合物;手性聚合物固定相;化石样品中氨基酸对映体的分析—化石地质年代测定