大肠埃希菌临床分离株高产ampc酶与基因介导、突变表达方式的研究.pdfVIP

采用反复冻融法提取B～内酰胺酶后，用三维酶抑制试验检测B～内酰胺酶活 两种酶，14株单产ESBLs，3株单产AmpC酶。 4 聚合酶链反应(PCR)扩增编码产ESBLs的脚细、6』岛。．，脚am和以函Iy 型常见基因和由质粒携带的编码产AmpC酶的6Ja。、盯幻、b』a。、6Ja。、6Ja。 和圳日。6型常见基因。34株扩增出6』8麒、6』目，、6』a。3型ESBLs基因中的 至少1型，未扩增出6』a。；8株扩增出质粒介导的ampC基因，7株为bl。，型， 1株为6J晶。型。 coli 在质粒转移试验中，用E C600作为接合受体菌、采用CRO和 cAz／CTX／cA两步淘筛法，进行对三代头孢菌素耐药性的传递试验。8株质粒型 锄pC基因扩增阳性的菌株，有7株筛选出接合子，其中有1株菌得到两种接合 选)；32株质粒型ampC基因扩增阴性的菌株，有3株菌未筛选出接合子，有2 株菌各筛到2种接合子，其中1种单产ESBLs(只通过第一步筛选)，另1种产 2种酶(可通过两步筛选)，其余27株菌的接合子只能通过第一 AmpC和ESBLs 步筛选，表型均为单产ESBLs。 对表型提示产AmpC酶，而未扩增出质粒型ampC基因的菌株，采用PCR技术 扩增ampC基因的启动子序列(包含衰减子)，用限制性内切酶Maelll进行酶切和 测序分析，并与E 位和／或衰减子区域的+22、+26、+27、+32位存在突变。 除此之外，用SDS电泳对这40株Ecoli的外膜蛋白进行分析，有38 株菌的外膜蛋白存在不同程度的缺失。 出率，而且方法简易，可以在临床微生物实验室的常规敏感试验中同时检测肠杆 菌科细菌的ESBLs，也可在一定程度上推测AmpC酶的存在。 Ⅱ 本研究结果表明，高产AmpC酶的￡coli已在临床出现，其中部分ampC基 因由质粒介导，大部分是ampC基因操纵子中的启动子和衰减子突变导致AmpC 酶的高表达，这些菌大多也存在外膜蛋白的改变。同时产AmpC和ESBLs两种高 coli对3、4代头孢菌素和加酶抑制剂药 活性B一内酰胺酶是目前临床分离的E 物耐药的主要原因。 外膜蛋白 HI of to Research AmpCHyperproducingPertaining of in FormsandMutation GeneClinical Mediate ExpressionampC coil IsolatesofEscherichia ABSTRACT which Escherichia isone bacteriacause coil隰colOofthe．commonpathogenic even tract infection，woundinfection，and udnaryinfection，respiratory systemic