复合型组织工程化自体皮肤体外快速构建的实验研究.pdfVIP

◇毫。墨荛兰 冠台型组织工程T巴自俸皮肤俸外燠莲相琏的饔验研宅 肤移植于裸鼠背部全层皮肤缺损创面，设三组对照，对照一：裸鼠自体全厚皮片 移植(将背部一～侧取下皮肤移植于另一侧)，对照二：单纯ADM移植，对照三： 裸露创面不做修复。修复后约6周，收集实验组创区皮肤，进行组织学功片H—E 染色，抗人角蛋白10(K10)一FI rc及K19一FITC免疫荧光检测。 结果： 、 】型胶原酶法分离所得的表皮细胞群中K】9阳性表达的细胞最高可接近 1-t 17％，比胰蛋白酶法及中性蛋白酶法高。表皮细胞群中，K19FITC及B 其克隆形成率介于1％8％之间；表皮绌胞单纯体外培养困难，添加K6F后，增殖 较快，且分化有所减缓，但仍渐分化成复层，并脱落；人成纤维细胞饲养层培养 的表皮细胞群，于约第3天时开始出现克隆样增殖，并渐出现复层化，经几次换 液后，复层化细胞脱落，残留细胞丌始呈现单层克隆样增殖，于约14天时渐推 开成纤维细胞，形成融合，但仍无法维持继续传代。I型胶原酶法分离表皮细胞 时，可同期获得成纤维细胞，体外培养扩增较容易，约7天左右即可扩增100 倍，vimentin—FITC免疫荧光染色呈阳性染色。利用先期接种表皮细胞于ADM， 再接种已扩增的成纤维细胞，并应用添加KGF的条件培养基培养，可以快速构建 出超过30倍于原取材面积的皮肤，表皮层连续，细胞层数多为23层，部分分 层较好，表皮层与真皮层之间的粘着均不紧密，真皮中含有成纤维细胞；表皮层 细胞计数显示，KGF添加组细胞计数明显高于未添加组。所构建皮肤能够较好的 修复皮肤缺损创面，创区皮肤表皮层分层好，均有34层细胞覆盖，真皮层胶原 排列有序，成纤维细胞分布均匀，未见皮肤附属器，与裸鼠自体全厚皮片移植修 复后的皮肤组织结构基本接近；抗人KIO FITC免疫荧光显示创区表皮层，绝大 部分细胞早绿色的阳性染色，抗人K19-FITC免疫荧光显示仅有极个别基底层细 胞呈绿色的阳性染色。 结论： 利用胶原酶消化法，以及涿加KGF的条件培养基，采用分步接种法，町以在 体外短期内(约8天)构建出足够可用(约30倍于取栩面积)的复合型组织工 程化自体皮肤，这可能为临床上严重烧创伤创面的覆盖解决了皮源问题。 关键词：表皮干细胞；角质细胞生长因子；组织工程；皮肤，自体：构建 lI @妻。．皇，蠹。．烹 夏合型组鲲工程亿自俸度肮俸外瞎莲相建的密验研究 ResearchonFastandEfficient of Reconstruction Composite SkinInVitro Tissue—Engineered Autogenous Master Candidate：HongQing-Qi Bin Supervisor：Yang ofPlastic DepartmentSurgery The SecondAffiliated ofSunYat—Sen Hospital University ABSTRACT 0bjeetives： Tofindafeasibleme