基因重组表达心肌肌钙蛋白t、i.pdfVIP

上海第二医科人学硕士论文 连续的两对AGG同时同义替换成CGT，结果就高效表达TnT蛋白。表达谷胱 糖亲和层析纯化融合蛋白。WesternBlot与电化学发光cTnT测定法，结果都表 明表达的融合蛋白和相应的抗体相互作用，且GST蛋白不与相应的抗体作用。 第二部分，不同的cTnl分子片段有不同的稳定性，对蛋白水解酶耐受力最 强的片段是cTnI的第28．110位氨基酸序列。这给我们提供了一条线索，通过基 因重组表达cTnI的第28—110位氨基酸，但是有文献报道仅仅重组表达该片段， 稳定性提高并不明显。考虑到融合蛋白不仅能增加目的蛋白的稳定性，而且有利 于表达后的提纯，我们拟通过基因重组克隆TnI(84．330bp)基因片段，与表达 载体pGEX．4T-3连接，使其在大肠杆菌中表达GST的融合蛋白。实验结果显示 纯化融合蛋白，WesternBlot与化学发光cTnI测定法，结果都表明表达的融合蛋 白和相应的抗体相互作用，且GST蛋白不与相应的抗体作用。采用ELISA法对 的稳定性优于天然提纯的TnI抗原。 总之，cTnT基因上的两对稀有密码子的同义替换，可提高其在E．Coli中的 表达量：选取cTnI耐受蛋白酶降解的基因区段，作GST融合蛋白表达，可改善 其稳定性。本文对cTnT与cTnI所作的GST融合表达的研究，目前国内外尚未 定的参考标准品。这些研究为建立相应的免疫测定提供了坚实的物质基础。 关键词：重组蛋白，肌钙蛋白T，肌钙蛋白I，免疫活性，稳定性 2 上海第二医科大学硕+论文 ofRecombinantCardiac T、I Expression Troponin Abstract ofacute infarctionare Early neither electrocardiographicchanges myocardial nor the medical hascometo on adequately sensitive，and specific profession rely serum biochemical markersofcardiactissue for injuryearly setummarkers ereatine thecardiacCK-MB kinase(CK)andspecifically isoform were amore used，and as sensitiveindicatorofcardiac subsequentlymyoglobin early andits damage．Morerecently,cardiac subunitshavecometobe troponincomplex as of markers becauseoftheir preferred myocardia