子宫肌瘤相关基因的筛查与克隆.pdfVIP

子宫埘L痈相关捧㈥的筛盎2j克降 本实验收集接受手术治疗并经病理证实为子宫肌瘤的患者共11例，每例患 者均取手术切除的肌瘤组织及正常子宫肌组织。用Trizol试剂提取组织总RNA； 采用荧光标记mRNA差异显示RT-PCR技术研究同一患者的子宫肌瘤组织与正 常子宫肌组织之间的基因表达差异；采用TA弧克隆技术结合PCR法对筛选的 行同源性检索，分析差异eDNA片段的信息；采用RT-PCR半定量技术对差异 cDNA片段在两种组织中的表达差别进行验证；采用图像分析系统分析电泳图像 各个条带的积分光密度并用SAS8．1统计软件包对量化数据进行统计学分析。 结果 1、荧光标记mRNA差异显示结果：子宫肌瘤和正常子宫肌组织的eDNA扩增产 物中存在着从300～900bp左右大小不等的差异片段，从12对两两比较的变性 胶中共找出27条差异条带。在子宫肌瘤组织中“增强”表达的条带共16条； 在正常组织中“增强”表达的差异条带共11条。 2、挑选其中8条差异片段进行TA亚克隆、测序及同源性比较，其中已知序列2 个，分别是NO．2为HomocloneGCRGll4mRNA sapiens sequence，NO．25 Weizmann Homo eDNA Epitheliumsapiens 为EST序列，yu66c01．slOlfactory clone，其余的为未知基因序列。 3、将8条差异片段在子宫肌瘤和正常子宫肌组织之间的表达状况进行RT-PCR 半定量验证，发现除差异片段NO．13未发现在其余10例正常与异常组织中 有表达外，差异片段NO．2，3，5，ll，12，19，25在子宫肌瘤组织中的表 达均存在差异，p0．05。其中差异片段NO．2在子宫肌瘤中的表达水平低于正 常子宫肌组织中的表达水平；其余的差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于 正常子宫肌组织中的表达水平。 基因名称ulapll，定位于4号染色体。 n r宫儿儿瘫相关基洲的筛盘‘J克隆 结论 l、本研究通过荧光标记mRNA差异显示来筛选同一患者的子宫肌瘤与正常子 宫肌组织之间差异表达的基因片段27条，在随机选取的8条差异片段经 RT-PCR半定量再证实，发现其中7条基因片段在子宫肌瘤组织中存在表达差 异。说明在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基冈的表达异常。 2、在本研究中首次发现GCGRll4基因在子宫肌瘤组织及正常予宫肌组织中均 有表达，且在子宫肌瘤中的表达水平低于正常子宫肌组织中的表达水平，推 测GCGRll4基因基因与子宫肌瘤的发病存在相关性。 宫肌组织中无表达，推测该基因极有可能在子宫肌瘤中呈特异性的表达。 知，这些基因在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。 推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关，其基因功能的变化可能是子宫 肌瘤众多发病因素中的某个环节或是病变的结果。 5、本研究共发现5条新的eDNA序列，说明应用荧光标记mRNA差异显示技术 既可以发现已知基因的表达差异，也可以发现未知基因的差异表达。 关键词：子宫肌瘤，差异显示，基因，克隆 11I 了富肌瘤相关拈B1的筛盎与克降 and ScreenCloneGenesRelatedto 1 Uterine leiomyoma and Major：Obstetrics Gynecology