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多重PCR检测霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究 多重POR检测霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究 摘 要 霍乱弧菌至少被分为190多个血清群，引起霍乱爆发流行的主要菌株为01群的CVC、 0139VC引起的爆发流行，世界上许多学者J京呼这是霍乱第八次流行的开始。食物传播是 霍乱的重要传播途径，霍乱病人是食用被该菌污染的生活用水、食品而感染发病。副溶血 性弧菌引起食物中毒是近20年才发现和重视的，尤其在夏秋季节的沿海地区，经常由于 食用含该菌的食品而引起的爆发性食物中毒。因此，建立特异、敏感、快速的检测方法， 检测、鉴定食品中的霍乱弧菌和副溶血性弧菌具有重要的意义。 本研究根据霍乱弧菌和副溶血性弧菌的毒素基因，建立了用多重PCR检测EVC、 测方法，对标准菌株的上述基因进行特异性扩增检测引物的特异性，扩增所获得产物经测 序，与Genbank提供的序列高度同源。在单基因检测的基础上建立了多重PCR系统，检 来检测VP，用该方法检测霍乱弧菌和VP标准菌株和野生株均扩增出与预期相符的特异 性条带，而其他非01非0139群霍乱弧菌和沙门氏菌等菌株均未扩增出特异性条带。 培养液和模拟样品。上述菌株的菌悬液用生理盐水lO倍递增稀释，以本方法检测稀释液 cfu／ml、5×102 cfu／ml、2．8×102 中EVC、CVC、0139VC、VP的灵敏性依次为2．2×102 cfu／ml、6．5×102cfu／ml。以罗非鱼肉、牡蛎肉、罗非鱼肠和鳃混合物为模拟样品，分别培 cftdg、 28 cfu／g、50 多重PCR检测霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究 建立的方法一致。 本研究系统地探索了用多重PCR技术检测食品中霍乱弧菌和VP的方法，方法简便、 特异性高、检测周期短，为开展食源性传染病的早期预警、监测、分析和调查以及降低食 源性病原菌的危害，将发挥积极的作用。 关键词：多重PCR，EVC，CVC，0139VC，VP，检测 多重PCR检测霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究 StudiesonDetectionofVibrio commaandVibrio Multi—PCR Using Abstract asat whichthemost commaisclassifiedleast190 strains 阳brio serotypes．in important outbreaksofcholeraareCVCandEVCfrom01 andstrainsfrom causingepidemic serogroup 0139VC comrtlabacilInsstrainswhichdonot to01and serogroup．Generally,those belong and 0139VC donot on causeoccasionallaxness serogroupsbring diseases．oriust